miR-455保护子宫内膜间质细胞免受过氧化氢诱导的损害

声明

引言

1实验材料与方法

1.1所需实验试剂：

1.2所需实验仪器：

1.3细胞培养和转染

1.3.1提前24h细胞种植

1.3.2转染过程

1.4实时荧光定量PCR（qRT-PCR）

1.4.1样品RNA的抽提：

1.4.2 RNA质量检测：

1.4.3样品cDNA合成

1.4.4梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR

1.4.5制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板

1.4.6待测样品的待测基因实时定量PCR

1.4.7电泳

1.5双荧光素酶分析

1.6细胞生存能力分析

1.7细胞凋亡检测

1.8 Caspase-3/7活性分析

1.9免疫印迹分析

1.9.3转膜(Transfer)

1.9.4封闭(Blocking)

1.9.5一抗孵育(Primary antibody incubation)

1.9.6二抗孵育(Secondary antibody inucubation)

1.9.7蛋白检测(Detection of proteins)

1.10测定ROS、LDH、CAT、GSH-Px、MDA、SOD活性

1.11统计分析

2结果

2.1过氧化氢诱导人子宫内膜间质细胞凋亡，降低miR-455的表达

2.2 miR-455过表达可保护HESCs免受h2o2诱导的凋亡

2.3 miR-455减轻H2O2诱导的HESCs氧化应激

2.4 miR-455负调控FABP4

2.5沉默FABP4将抑制miR-455的作用

2.6 FABP4的上调降低了miR-455对H2O2的保护作用

讨论

结论

参考文献

附录A 综述:子宫内膜损伤修复的研究进展

在 学 研 究 成 果

致谢