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人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株MMP-9和TIMP-1表达的影响的实验研究

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前言

一、实验材料

（一） 实验细胞

（二）实验药物

（三）实验试剂DMEM培养液

（四）主要试剂配方

（五）仪器设备CO2培养箱

（六）主要实验器具的处理

二、实验方法

（一）RT-PCR法检测HT-29细胞MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达

（二）MTT法测定人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞的抑制率

三、结 果

（一）人参皂苷Rg3对MMP-9 mRNA表达的影响

（二）人参皂苷Rg3对TIMP-1 mRNA表达的影响

（三）人参皂苷Rg3对结肠癌细胞的抑制率的影响

四、分析与讨论

（一）祖国医学对大肠癌的认识

（二）现代医学治疗大肠癌的现状

（三）人参皂苷Rg3对肠癌细胞MMP-9 mRNA和TIMP-1及对肠癌细胞抑制的影响

结论

参考文献

致谢

附 文献综述:人参皂苷Rg3抗肿瘤作用的研究进展

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摘要

目的：　　研究人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）mRNA和组织金属蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase1，TIMP-1）mRNA表达的影响及采用MTT法测定人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞的抑制率，从而探讨人参皂苷Rg3抑制肿瘤细胞侵袭、转移的机制。　　方法：　　体外培养人结肠癌细胞株HT-29细胞。用高剂量（100μg/ml）、中剂量（50μg/ml）和低剂量（25μg/ml）人参皂苷Rg3培养HT-29细胞24小时、48小时、72小时。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达情况。采用MTT法检测人参皂苷Rg3对肿瘤细胞的抑制率。统计采用SPSS14.0软件包，两因素析因方差分析，并多重比较。检验水准以P<0.05作为有显著性差异，P<0.01作为有非常显著性差异。　　结果：　　1.RT-PCR方法检测Rg3对HT-29细胞MMP-9 mRNA表达的情况，方差分析，24小时组：对照组与低、中剂量组相比，无统计学差异（P>0.05、P>0.05）,与高剂量组相比，有显著的统计学差异（P<0.01）；48小时组：对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异（P<0.05、P<0.01、P<0.01）；72小时组：对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01、P<0.01）。低剂量组：24小时组与48小时、72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01），48小时组与72小时组相比，无统计学差异（P>0.05）；中、高剂量组：24小时组与48小时组相比，无统计学差异（P>0.05），24小时组、48小时组与72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01）。提示人参皂苷Rg3可以抑制HT-29细胞MMP-9 mRNA的表达，抑制作用随着剂量的增加及时间的延长而增强。　　2.RT-PCR方法检测Rg3对HT-29细胞TIMP-1 mRNA表达的情况，方差分析，24小时组：对照组与低剂量组相比，无统计学差异（P>0.05），与中、高剂量组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01）；48小时组和72小时组：对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01、P<0.01）。低剂量组：24小时组与48小时组相比，无统计学差异（P>0.05），24小时组与72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01），48小时组与72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.05）；中、高剂量组：24小时组与48小时组、72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01），48小时组与72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01）。提示人参皂苷Rg3可以促进HT-29细胞TIMP-1 mRNA的表达，促进作用随着剂量的增加及时间的延长而增强。　　3.MTT法检测人参皂苷Rg3对肿瘤细胞的抑制率，方差分析，24小时组：低剂量组与中剂量组相比，无统计学差异（P>0.05），低、中剂量组与高剂量组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01）；48小时组，低剂量组与中、高剂量组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01），中剂量组与高剂量组相比，无统计学差异（P>0.05）；72小时组：低剂量组与中、高剂量组相比均有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01），中剂量组与高剂量组相比，有显著的统计学差异（P<0.01）。低、中、高剂量组：24小时组与48小时组、72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01、P<0.01），48小时组与72小时组相比，有显著的统计学差异（P<0.01）。说明人参皂苷Rg3对HT-29细胞生长的抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关。　　结论：　　1.抑制MMP-9的表达，促进TIMP-1的表达，是人参皂苷Rg3抗肿瘤的机制之一。在一定的药物浓度和作用时间范围内，人参皂苷Rg3对HT-29细胞表达MMP-9 mRNA有抑制作用，并且随着药物浓度的增加及时间的延长，抑制作用增强；对HT-29细胞表达TIMP-1 mRNA有促进作用，并且随着药物浓度的增加及时间的延长，促进作用增强。　　2.人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞生长的作用。在一定的药物浓度和作用时间范围内，人参皂苷Rg3对HT-29细胞生长的抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关。

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