过表达α--淀粉酶、脯氨酰内肽酶黑曲霉的发酵调控研究

声明

摘要

1 引言

1．2．1微生物表达系统概况

1．2．2丝状真菌蛋白分泌途径及其质量控制研究进展

1．2．3分泌蛋白表达过程的发酵调控

1．3本论文主要研究的内容

2材料与方法

2．1试验材料

2．1．1菌种和载体

2．1．2酶和主要生物试剂

2．1．3引物

2．1．5常用试剂的配制

2．1．6各种实验仪器

2．2．1PCR扩增

2．2．2目的片段的回收

2．2．3连接反应

2．2．4大肠杆菌的转化

2．2．5质粒提取

2．2．6大肠杆菌重组质粒的鉴定

2．2．7序列分析

2．2．8冻融法转化农杆菌

2．2．9农杆菌介导法转化黑曲霉

2．2．10黑曲霉纯合重组菌株的SDS-PAGE检测

2．2．12脯氨酰内肽酶酶活测定

2．2．13 Western Blot

2．2．14 RNA提取、反转录和荧光定量PCR

2．2．15菌丝体免疫荧光染色

3结果与分析

3．1．1 α-淀粉酶基因amyAF黑曲霉表达载体的构建

3．1．2 α-淀粉酶基因amyAF农杆菌转化子的筛选和鉴定

3．1．4重组菌株G1A的SDS-PAGE检测

3．1．5重组菌株G1A的酶活测定

3．1．6重组菌株G1A的发酵调控分析

3．1．7重组菌株G1A中α-淀粉酶的细胞定位

3．2过表达脯氨酰内肽酶黑曲霉的发酵调控

3．2．1转录水平分析

3．2．2蛋白水平分析

3．2．3酶活水平分析

4讨论

4．1碳源对黑曲霉分泌蛋白表达的影响

4．2添加CPPs对黑曲霉分泌蛋白表达的影响

4．3添加TUDCA对黑曲霉分泌蛋白表达的影响

4．4存在的问题和研究展望

5结论

致谢

参考文献