大豆GmCLV1、GmCLV3基因在根瘤发育中的功能初探

声明

摘要

1前言

1．1研究的目的和意义

1．2分生组织

1．2．1顶端分生组织

1．2．2茎端分生组织活性调节的关键基因

1．3豆科植物的结瘤与固氮

1．3．1生物固氮

1．3．2根瘤的形成过程

1．3．3影响根瘤发育的因素

1．4CLV家族的研究进展

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1植物材料

2．1．2菌株材料与质粒载体

2．1．3实验试剂

2．1．4培养基和抗生素

2．1．5实验所用到的所有引物

2．2实验方法

2．2．1生物信息相关的在线软件

2．2．2植物材料的培养

2．2．3植物总DNA、RNA的提取及cDNA的合成

2．2．4实验所用的载体构建

2．2．5CRISPR-Cas9载体构建

2．2．6过表达载体构建

2．2．7大豆发根转化过程

2．2．8阳性根的鉴定

2．2．9大豆结瘤试验

3结果与分析

3．1生物信息学分析

3．1．1基因序列分析

3．1．2亲疏水性预测分析

3．1．3保守结构域及跨膜结构域预测

3．1．4二级结构及三级模型预测分析

3．2GmCLV1-GmCLV3基因表达分析

3．3大豆GmCLV1和GmCLV3相关载体的构建

3．3．2CRISPR-Cas9载体构建

3．3．3过表达载体构建

3．3．4本实验所构建的载体

3．4启动子活性分析

3．4．1发根RFP基因的检测

3．4．2GmCLV1和GmCLV3在根中的表达

3．5GmCLV1-2和GmCLV3-1转基因材料的获得和鉴定

3．5．1靶基因的敲除位点检测

3．5．2过表达载体的鉴定

3．6发根转化植株的表型分析

4讨论

4．2影响基因编辑效率的因素

4．3发根植株表型鉴定

5结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文