声明
摘要
1引言
1．1硫化氢(H2S)的毒性
1．1．1H2S的来源
1．1．2H2S的危害
1．1．3H2S的监测与意义
1．2细胞焦亡的研究进展
1．2．1炎性小体与细胞焦亡的关系
1．2．2活性氧与细胞焦亡的关系
1．3非编码RNA与细胞焦亡
1．3．2ceRNA与细胞焦亡的关系
1．4研究目的与意义
2材料与方法
2．1主要仪器与试剂
2．1．1主要仪器
2．1．2主要试剂
2．2试验方法
2．2．1某市鸡场冬季12月份舍内H2S的含量调查
2．2．2H2S暴露实验模型的建立
2．2．3鸡气管组织免疫组织化学观察
2．2．4鸡气管组织组学检测
2．2．5蛋白的提取和免疫印迹的检测方法
2．2．6鸡LMH细胞的培养方法
2．2．7鸡气管组织和LMH细胞中circRNAs表达和焦亡相关基因的检测方法
2．2．8鸡气管组织和LMH细胞中miRNA表达的检测方法
2．2．9 miR-6631-5p过表达／敲低和DUSP6敲低LMH细胞模型的建立
2．2．10双荧光素酶报告基因系统分析circRNA-17828与miR-6631-5p的靶向关系
2．2．11双荧光素酶报告基因系统分析DUSP6与miR-6631-5p的靶向关系
2．2．12ROS的检测方法
2．2．13 Annexin V-FITC／Propidium Iodide／Hoechst染色的检测方法
2．3试验数据的统计与分析
3结果与分析
3．2．1 H2S暴露下鸡气管组织中circRNAs的测序结果和验证
3．2．2 H2S暴露下鸡气管组织中circRNA-miRNA-mRNA调控轴系预测结果
3．3 H2S暴露下鸡气管组织中差异表达基因参与的通路和GO项目富集分析结果
3．4H2S暴露下鸡气管内细胞焦亡相关指标的变化
3．4．1H2S暴露下鸡气管内细胞焦亡重要指标的免疫组化分析结果
3．4．2H2S暴露下鸡气管内细胞焦亡相关基因表达水平的检测结果
3．4．3H2S暴露下鸡气管内细胞焦亡相关指标的蛋白水平的检测结果
3．5 circRNA-17828／miRNA-6631-5p／DUSP6调控轴系的验证
3．5．1 LMH细胞miR-6631-5p的过表达／敲低模型的建立
3．5．2LMH细胞DUSP6敲低模型的建立
3．5．3 circRNA-17828与miRNA-6631-5p靶向调控关系的验证结果
3．5．4 miR-6631-5p与DUSP6的靶向调控关系的验证结果
3．6敲低或过表达miR-6631-5p对LMH细胞中ROS产量的影响
3．7敲低DUSP6和miR-6631-5p对LMH细胞中ROS产量的影响
3．8敲低miR-6631-5p对H2S诱导的细胞焦亡的影响
3．8．2敲低miR-6631-5p对H2S诱导的细胞焦亡相关基因表达水平的检测结果
3．8．3敲低miR-6631-5p对H2S诱导的细胞焦亡相关指标的蛋白水平的检测结果
3．9敲低或过表达miR-6631-5p对细胞焦亡的影响
3．9．3敲低或过表达miR-6631-5p对细胞焦亡相关指标的蛋白水平的检测结果
3．10敲低DUSP6和miR-6631-5p对细胞焦亡的影响
3．10．3敲低DUSP6和miR-6631-5p对细胞焦亡相关指标蛋白水平的检测结果
4讨论
4．1鸡舍内H2S含量的分析
4．2H2S与鸡气管细胞焦亡的关系
4．3H2S对鸡气管组织circRNA组学的影响
4．4 H2S对circRNA-17828／miR-6631-5p／DUSP6轴的影响
4．5 H2S通过circRNA-17828／miR-6631-5p／DUSP6轴系对ROS水平调节诱导细胞焦亡
4．5．2miR-6631-5p／DUSP6对ROS水平的调节
4．5．3 miR-6631-5p／DUSP6信号对ROS和细胞焦亡的影响
5结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
东北农业大学;
