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摘要
1.1 引言
1.2 精子发生
1.2.1 生殖细胞命运决定
1.2.2 原始生殖细胞迁移和存活
1.2.3 性原细胞增殖、静息和迁移
1.2.4 精原细胞自我更新和分化
1.2.5 精母细胞减数分裂
1.2.6 精子形成
1.3 范可尼贫血与DNA链间交联修复
1.3.1 范可尼贫血
1.3.2 DNA链间交联产生原因和结果
1.3.3 FA通路与链间交联修复
1.3.4 FA通路的其他作用
1.3.5 FA通路与其他修复机制的交互作用
1.4 FANCM的功能
1.4.1 FANCM在FA通路的功能
1.4.2 FANCM的独特作用
1.4.5 FANCM在复制叉重塑中的作用
2.1.1 小鼠信息
2.1.2 细胞系及菌种
2.1.3 质粒载体
2.1.4 引物序列
2.1.5 抗体信息
2.1.6 耗材及试剂
2.1.7 实验仪器
2.1.8 溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 病例收集
2.2.2 全外显子组测序
2.2.3 外周血淋巴细胞培养及染色体断裂分析
2.2.4 质粒构建
2.2.5 细胞培养及转染
2.2.6 构建FANCM-/-稳定的293T细胞系
2.2.7 外源导入FANCM回补内源FANCM敲除实验
2.2.8 免疫荧光
2.2.9 Western Blot
2.2.10 RNA抽提
2.2.11 RT-PCR
2.2.12 基因敲除小鼠制备
2.2.13 小鼠生育力检测
2.2.14 睾丸组织包埋及切片
2.2.15 组织切片苏木精伊红染色(HE)
2.2.16 组织切片免疫荧光染色
2.2.17 小鼠精母细胞铺展及染色
2.2.18 BrdU染色
2.2.20 精子计数
2.2.21 精原细胞中期染色体断裂分析
2.2.22 统计学分析
3.1 实验结果
3.1.1 巴基斯坦近亲结婚家系中男性不育的临床表型
3.1.2 巴基斯坦家系不育患者中筛选并确定FANCM纯合移码突变
3.1.3 FANCM突变导致患者染色体断裂修复缺陷但不导致骨髓衰竭
3.1.4 FANCM突变功能缺失损害FA通路
3.1.5 FANCM突变降低细胞存活率
3.1.6 FancmΔC/ΔC小鼠无骨髓衰竭
3.1.7 FancmΔC/ΔC雄性小鼠生育力降低
3.1.8 FancmΔC/ΔC雄性小鼠精子发生异常
3.1.9 FancmΔC/ΔC雄性小鼠出生前后生殖细胞增殖减少
3.1.10 FANCM突变与精子变形阶段DNA断裂修复
3.2 讨论
参考文献
攻读博士期间的主要学习成果
致谢
附录