伪狂犬病毒ICC-qPCR方法的建立、优化及在动物源性医疗器械病毒灭活验证中的应用

声明

第一章 绪论

1.1.1 医疗器械的市场及作用

1.1.2 医疗器械的分类

1.1.3生物源医疗器械

1.2.1 动物源性医疗器械的优势和劣势

1.2.2 免疫原性风险

1.2.3 外源因子风险

1.2.4 病毒去除/灭活验证研究

1.3 病毒灭活验证方法

1.3.1 传统的病毒灭活验证方法

1.3.2 病毒检测的qPCR和ELISA方法

1.3.3 酶处理-qPCR方法

1.3.4 PMA/EMA-qPCR

1.3.5 Integrated Cell Culture-qPCR (ICC-qPCR)

1.4.1 研究目的

1.4.2 研究内容

1.4.3 本论文的主要创新点

第二章 PRV 病毒常规ICC-qPCR 方法的建立

2.1 引言

2.2.1 实验试剂及仪器

2.2.2 实验方法

2.3结果及讨论

2.3.1 PK15细胞形态及PRV病毒的细胞病变效应

2.3.2 PRV保守序列的确定、引物的设计及qPCR条件的优化

2.3.3 24孔板细胞接板量的优化

2.3.4 PRV病毒扩增时间的优化及标准曲线的确定

2.4本章小结

第三章 常规ICC-qPCR 方法中非感染性病毒造成的假阳性信号的去除及验证

3.1 引言

3.2.1 实验试剂及仪器

3.2.2实验方法

3.3.1 PRV病毒的灭活及去除验证

3.3.2 ICC-qPCR检测时非感染性病毒影响的去除

3.3.3模拟样本的常规ICC-qPCR、优化ICC-qPCR及细胞培养法的病毒检测结果

3.4 本章小结

第四章 优化的PRV 病毒ICC-qPCR 方法的验证及应用研究

4.1 引言

4.2.1 实验试剂、材料及仪器

4.2.2 实验方法

4.3.1辐照后脱细胞猪角膜材料的细胞毒测试结果

4.3.2样品的常规ICC-qPCR、优化ICC-qPCR及细胞培养法病毒检测结果

4.4 本章小结

结论

致谢

参考文献

参研课题及科研成果