人类ZO2蛋白质第二个PDZ结构域的溶液结构和功能的研究

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论(极化细胞紧密连接研究进展)

1.1紧密连接的结构

1.2紧密连接中的跨膜蛋白

1.3外围膜蛋白

1.4紧密连接MAGUK蛋白的结构与功能

1.5紧密连接蛋白的分子间相互作用

1.6紧密连接的分子装配

1.7紧密连接的多种功能

1.8紧密连接在细胞增殖、分化及基因表达方面的作用

1.9紧密连接中的信号传导

1.10血脑屏障中的紧密连接

1.11结语

参考文献

第二章人类Z02蛋白质第二个PDZ结构域的溶液结构和功能的研究

第一部分背景知识

2.1三维空间的结构域交换

第二部分材料和方法

2.2试剂和抗体

2.3人ZO-1及ZO-2蛋白PDZ2结构域基因的亚克隆

2.4人ZO-1，ZO-2蛋白质第二个PDZ结构域的表达与纯化

2.5蛋白质分子量鉴定

2.6蛋白纯度及均一性鉴定

2.7蛋白质浓度的测定

2.8 PDZ结构域的二级结构特性的光谱学研究（圆二色光谱（CD））

2.9采用毛细管等电聚焦电泳测定W2，W37等电点

2.10 Western Blotting

2.11免疫共沉淀

2.12细胞培养

2.13细胞转染

2.14 FPLC液相色谱

2.15沉降速率分析

2.16利用DSS对His-融合蛋白进行交联

2.17激光动态光散射

2.18原子力显微镜方法

2.19 NMR实验

2.20 NMR结构计算

2.21 NMR波谱解析人ZO-2第二个PDZ结构域的三维溶液空问结构

第三部分实验结果

2.22成功构建了22个重组质粒

2.23 PDZ结构域蛋白的表达和纯化

2.24 PDZ结构域蛋白的分子量鉴定

2.25 PDZ结构域蛋白的二级结构特性的CD光谱学研究

2.26毛细管等电聚焦电泳测定ZO1-PDZ2/ZO2-PDZ2的等电点

2.27 Z02-PDZ2的化学位移认证

2.28 Z02-PDZ2的氢氘交换实验

2.29 Z02-PDZ2的二级结构分析

2.30氮标蛋白和非标蛋白间的滴定结果

2.31 Z01-PDZ2和Z02-PDZ2之间及它们白身的相互作用

2.32 Z01-PDZ2和Z02-PDZ2在溶液中可以形成紧密的同二聚体和异二聚体

2.33 Z02-PDZ2的NMR结构解析

2.34 Z02-PDZ2二聚体的结构描述

2.35 Z02-PDZ2同二聚体的界面

2.36 Z01-PDZ2和Z02-PDZ2寡聚的证据

2.37讨论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文与取得的研究成果

致谢