摘要
Abstract
第一章文献综述
第二章实验材料与方法
第一节实验材料
第二节实验方法
1.表达纯化SIS 1，Ssal的PBD片段及LID片段蛋白
2.CSIS1与Ssa1的LID及PBD蛋白之间的pull-down实验
3.CSIS 1和HSP70的LID片段结合的复合物
4.CSIS 1和HSP70的PBD片段结合产物
5.HSP70的LID片段降解产物的N端氨基酸序列测定
6.克隆，表达LID片段的删除突变片段(LID△G)
7.生长CSIS-LID复合物晶体
8.生长CSIS 1-LID△G复合物的晶体
9.克隆表达selenomethionine-SISl和selenomethionine-LID蛋白
10.生长Se-CSIS 1和Se-LID复合物晶体
11.利用ITC(微热测量仪)测定HSP70C末端4,7，15,26氨基酸与CSIS1之间的相互作用
12.生长CSIS与HSP70 C末端4 (L4)，15(l15)，26(l26)氨基酸复合物晶体
13.利用AFM直接观察CSIS 1，LID，CSIS 1-LID蛋白质分子构象
14.X-ray对各种复合物晶体的衍射
第三章实验结果
1.SISI蛋白的表达量约为80-100mg/1升LB培养基
2.Ssa1的LID和PBD蛋白的表达和前述的SIS1蛋白大致相同
3.CSIS 1，LID，PBD蛋白间的pull-down实验
4.既然pull-down实验说明CSIS1很可能和LID及PBD的蛋白结合，下一步就是设法得到CSIS1和LID蛋白复合物及CSIS1和PBD蛋白复合物
5.生长CSIS1-LID复合物的晶体前，先用Hampton公司的晶体生长条件的筛选试剂合(I和II)筛选可能的晶体生长条件
6.质谱显示的小分子量蛋白是来自LID蛋白的降解产物，为了确定它在LID的位置，首先将已经降解的CSISL-LID进行SDS蛋白电泳，显示LID降解出一条约10KD左右的片断
7.接近LIDC末端约35-16个氨基酸处
8.为了确定这些LIDC末端的肽段到底是否和CSIS1结合，我们还利用ITC(微热测量仪)进行研究
9.为了直观地观察溶液CSIS-LID复合物的结合情况，我们利用AFM在(原子力显微镜)观测，AFM理论上可达到纳米级分辨率
10.CSIS1-LID复合物晶体被带到同步辐射加速器，利用X-ray源进行衍射并收集数据
第四章讨论
1.CSIS 1和LID的结合
2.CSIS1不但和LID结合，而且LID末端的8-15个氨基酸是结合的位置所在
3.CSIS 1和LID及LID突变体，LID末端氨基酸结合的复合物晶体情况
4.从AFM的结果认识CSIS 1和LID的结合
第五章总结
图表
参考文献
致谢
中国科学技术大学;
