EYA4基因在食管鳞癌中的甲基化状态及其抑制食管鳞癌细胞侵袭转移的机制研究

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中英文缩略词表

摘要

前言

一、食管癌发病机制的研究进展

二、上皮-间质转化在食管鳞癌中的研究进展

三、EYA基因家族在肿瘤中的研究进展

实验材料

一、实验试剂

二、主要仪器设备

三、溶液配制

实验方法

一、食管鳞癌组织标本的收集

二、食管鳞癌细胞系及其药物处理

三、食管鳞癌组织及细胞系中基因组DNA及总RNA的提取

四、甲基化特异性PCR及亚硫酸氢盐处理后测序

五、RT-PCR半定量检测mRNA的表达水平

六、western blot检测蛋白的表达水平

七、构建质粒

八、免疫荧光

九、细胞功能学实验

十、动物实验

十一、统计方法

实验结果

一、食管鳞癌组织和细胞系中EYA4基因存在异常的高甲基化

1．1 EYA4基因在食管鳞癌组织中的甲基化情况

1．2 EYA4基因甲基化水平与食管鳞癌临床病理因素的相关关系

1．3 EYA4基因在食管鳞癌细胞系中的甲基化情况

1．4 食管鳞癌细胞系中EYA4基因的表达水平

1．5 食管鳞癌细胞系经5-aza-dC处理后EYA4基因启动子区甲基化情况的检测

1．6 食管鳞癌细胞系经药物诱导后EYA4基因表达水平的检测

二、在食管鳞癌细胞系中EYA4基因功能的研究

2．1 食管鳞癌细胞系中EYA4基因的表达水平

2．2 建立EYA4敲降和过表达的稳转细胞系

2．3 EYA4对食管鳞癌细胞的增殖没有明显影响

2．4 EYA4能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭和转移

三、EYA4在食管鳞癌细胞系中抑制EMT的机制研究

3．1 RT-PCR检测EYA4基因表达水平改变后EMT相关基因的表达水平

3．2 western blot检测食管鳞癌细胞系中EYA4表达水平改变后EMT相关蛋白的表达水平

3．3 免疫荧光染色检测食管鳞癌细胞系中EYA4基因敲降后EMT相关蛋白的表达情况

3．4 EYA4基因通过抑制AKT／GSK3 β信号通路发挥抑制EMT的作用

四、TGF诱导EYA4表达下调及其可能的机制

4．1 TGF-β1诱导EYA4 mRNA表达水平下调

4．2 TGF-β1诱导EYA4蛋白表达水平下调的时间和浓度效应

4．3 TGF-β1诱导EYA4 mRNA和蛋白表达水平下调的机制

4．4 在食管鳞癌细胞系中EYA4抑制TGF-β1诱导的EMT

4．5 EYA4基因抑制TGF-β1诱导的EMT的机制

五、在食管鳞癌细胞系中EYA4基因能够促进DNA损伤的修复

5．1 EYA4基因能够促进顺铂诱导的DNA损伤修复

5．2 EYA4抑制食管鳞癌细胞系发生顺铂诱导的细胞凋亡

5．3 EYA4促进DNA损伤修复的机制研究

讨论

小结

参考文献

基金资助

在学期间发表论文

文献综述

致谢

个人简历

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