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【6h】

针刺百会和足三里穴对脑缺血再灌注损伤大鼠炎症机制的研究

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摘要

研究目的
　　 在前期研究基础上，采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)大鼠模型，检测中枢双侧相关脑区炎症损伤信号链中的炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α及外周血中的IL-1β、IL-6、TNF-α和损伤应激信号热休克蛋白(HSP)70表达的变化，探讨针刺百会和足三里穴对脑缺血再灌注损伤炎症机制的干预作用。
　　 实验方法
　　 大鼠随机分为针刺组、模型组和假手术组，每组再根据再灌注后时间分成12h、24h、48h、72h、96h和144h6个时间点，每个时间点8只大鼠，另设正常对照组大鼠8只；以右侧大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型，针刺组为造模成功后在规定时间内针刺百会和足三里穴。
　　 分别应用TTC染色法验证模型及提供实验定位标记，应用HE染色观察细胞的形态类型；应用免疫组织化学技术和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析中枢双侧脑区及外周血中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和损伤应激蛋白HSP70表达的变化。
　　 实验结果
　　 1．TTC染色：脑组织大脑中动脉供血区域，可见到白色的梗死灶，与鲜红色的正常脑组织形成对比；且视交叉前后的脑片梗死灶较稳定。这为我们下一步研究脑缺血中枢炎症机制提供较好的实验定位标记。
　　 2.HE染色：损伤核心区的病理损伤高峰时间出现在脑缺血后48h，72h后水肿减轻，胶质细胞和胶原纤维增生，大量新生血管出现，96h最为明显。
　　 3．ELISA结果分析：
　　 1)IL-1β在脑缺血模型组大鼠外周血清中呈双峰形表达，峰值时间为24h和96h;在针刺组大鼠各个时间点外周血清中表达下调，以24h组最显著；在假手术组24h组最高。
　　 2)IL-6在各组大鼠外周血清中表达显示：假手术组呈双峰形表达，峰值时间在24h和72h;模型组的表达高于正常对照组；针刺组呈单谷型分布，谷值时间为48h，且针刺组表达低于模型组和假手术组；各组大鼠外周血清IL-6的表达均高于正常对照组。
　　 3)TNF-α在各组大鼠外周血清中均呈单峰形表达，模型组和针刺组的峰值时间均为24h，但针刺组各个时间点表达低于模型组；各组的TNF-α表达均高于正常对照组。
　　 4)HSP70在各组大鼠外周血清中的表达均较正常组高，模型组及假手术组峰值时间均为12h;针刺组表达的峰值时间在24h，72h后表达降至基线水平，且表达量低于模型组和假手术组。
　　 4．免疫组化染色：
　　 1)IL-1β在脑缺血大鼠患侧缺血脑区呈双峰表达，模型组峰值时间为48h和96h，针刺组为24h和72h，且针刺组表达量显著低于模型组，但高于假手术组和正常对照组；健侧非缺血脑区的表达高于正常对照组和假手术组。
　　 2)IL-6在患侧缺血脑区呈单峰表达，模型组峰值时间为96h，针刺组为72h，针刺组表达量显著低于模型组，但高于假手术组和正常对照组；健侧脑区IL-6表达高于正常对照组和假手术组。
　　 3)TNF-α在患侧缺血脑区呈单峰表达，模型组和针刺组峰值时间均为72h，针刺组表达量显著低于模型组，但高于假手术组和正常对照组；健侧非缺血脑区的表达均低于患侧缺血脑区，但高于正常对照组和假手术组。
　　 结论
　　 1．针刺百会和足三里穴可抑制中枢损伤脑区损伤相关的炎性细胞因子表达，促进损伤-修复相关的细胞因子表达，使修复时相前移，加速损伤修复。
　　 2．针刺百会和足三里穴对机体宏观生理功能调节网络的影响可能是通过对损伤对侧和全身的功能调节，降低免疫系统对中枢局部脑组织损伤的炎症应答，促进损伤修复信号链活化。
　　 创新点
　　 以线栓法制备经典的脑缺血再灌注损伤大鼠模型，根据再灌注后时间分别取12h、24h、48h、72h、96h和144h6个时间点，探讨针刺百会、足三里穴对脑缺血再灌注损伤大鼠中枢双侧脑区炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达，及外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α和损伤应激蛋白HSP70的表达变化。针刺百会、足三里穴干预脑缺血再灌注损伤大鼠的炎症损伤机制可能是通过调节炎症损伤及损伤修复网络来实现的。经文献检索，尚未发现针刺百会和足三里穴同时对脑缺血再灌注损伤大鼠双侧脑组织及外周血炎性因子的干预研究。

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