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【6h】

重组B群脑膜炎球菌fHBP融合蛋白的表达和免疫原性研究

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摘要

A、C、Y、W135脑膜炎球菌多糖疫苗的使用有效的预防了细菌性脑膜炎的发生[1]。但由于B群脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria Meningitis Group B,MenB)荚膜多糖结构因与人体正在发育的神经组织及少数成熟组织中的神经细胞黏附分子同源,而不能激发有效的保护性免疫[2]。目前国内外有关MenB疫苗的研究主要集中于外膜蛋白上,其中位于MenB外膜上的与致病性密切相关的H因子结合蛋白(Factor H-binding Protein,fHBP),由于其具有较高的保守性成为了最有希望的MenB候选疫苗抗原之一。在补体级联反应中,H因子是补体替代途径的关键调节子,它在因子I介导的Cab裂解为灭活片段iC3b过程中发挥辅助因子作用,也能促进替代途径C3转化酶C3bBb的衰变。fHBP和H因子的结合可下调替代途径,从而有利于B群脑膜炎奈瑟菌在机体内的存活。根据fHBP氨基酸的差异,可以将MenB分为V1、V2、V3三个fHBP变异型,变异型内氨基酸序列高度保守而变异型间差异较大,针对fHBP的抗体在变异型内具有保护作用[3、4]。分析fHBP氨基酸序列发现,fHBP包含有三个结构域ABC,A结构域在三个变型中是一致的,所有V1都表达的一个抗原表位位于B结构域,而V2或V3的抗原表位位于C结构域的174—216位氨基酸[5、6],V2与V3174—216位氨基酸序列仅有个别氨基酸差异[7]。因此,由V1变异型的全长fHBP和V2变异型C结构域174—216位氨基酸抗原表位组成的融合蛋白理论上有可能能诱发机体产生针对所有MenB的保护性抗体。
　　 本实验采用PCR构建了编码B群脑膜炎球菌fHBP蛋白V1变异型全长序列和V2变异型C结构域具有免疫效应抗原表位融合蛋白的基因片段,将此基因片段克隆入pET30a(+)载体后,转化E.coli BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定分析,经层析纯化,获得的蛋白纯度达到90％以上。融合蛋白免疫小鼠后,分别测定血清中fHBP特异抗体和血清杀菌抗体,结果显示融合蛋白能诱导机体产生高效价的抗体,并且此抗体能诱发补体依赖的杀菌反应,证明了MenB的fHBP-C2融合蛋白是一种良好的抗原,为以fHBP为抗原的MenB疫苗研究积累了科学资料。

著录项

  • 作者

    彭世泽;

  • 作者单位

    北京协和医学院;

    中国医学科学院;

    清华大学医学部;

    北京协和医学院(中国医学科学院);

  • 授予单位 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院(中国医学科学院);
  • 学科 免疫学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 徐维明,李智华,李健峰;
  • 年度 2011
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 免疫血清学;
  • 关键词

    脑膜炎奈瑟氏菌; fHBP蛋白; 原核表达; 免疫原性; 融合蛋白;

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