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【24h】

Processing of GPI-anchored cell wall proteins in Saccharomyces cerevisiae and a role for DCW1.

机译：酿酒酵母中GPI锚定的细胞壁蛋白的加工和DCW1的作用。

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摘要

The yeast cell wall acts as a scaffold to support and display GPI-anchored cell wall proteins (GPI-CWPs) at the cell surface. These proteins are required for normal cell growth and perform a variety of functions, interacting with the environment, in structural roles and as enzymes. In Part I of this dissertation we demonstrate a role for DCW1 in the processing of GPI-CWPs. Temperature sensitive dcw1 mutants show growth arrest, loss of viability, a significant reduction in crosslinking of a model GPI-CWP into the cell wall and persistence of this GPI-protein at the membrane. These phenotypes are seen both with and without osmotic stabilization, and are not simply a result of activation of the cell wall integrity pathway.;In Part II we discuss the construction of a 6-Histidine epitope tagged β-1,3-endoglucanase from the soil bacterium, Cellulosimicrobium cellulans. When expressed in BL21 cells under the control of an inducible promoter, the construct allows purification by immobilized metal affinity chromatography of a protease-free glucanase for digesting yeast cell wall glucan with subsequent analysis of the protein content.;Part III serves to discuss early work to manipulate GPI-CWP expression for use in immunological studies. We show efficient surface expression of GPI-anchored peptides from chick ovalbumin, an exogenous protein, in Saccharomyces cerevisiae. These peptides were affinity purified from the cell wall and shown to elicit an in vitro immune reaction divergent from larger cell wall fragments.
机译：酵母细胞壁充当支架，以在细胞表面支持和展示GPI锚定的细胞壁蛋白（GPI-CWP）。这些蛋白质是正常细胞生长所必需的，并具有多种功能，可与环境相互作用，具有结构性作用和作为酶。在本文的第一部分，我们演示了DCW1在GPI-CWP处理中的作用。对温度敏感的dcw1突变体显示出生长停滞，活力丧失，模型GPI-CWP交联到细胞壁中的交联显着减少以及该GPI蛋白在膜上的持久性。这些表型在有和没有渗透稳定的情况下都可以看到，而不仅仅是细胞壁完整性途径激活的结果。在第二部分中，我们讨论了从细胞表面构建6-组氨酸表位标记的β-1,3-烯葡聚糖酶的方法。土壤细菌，纤维素微纤维素纤维素。当在诱导型启动子的控制下在BL21细胞中表达时，该构建体可以通过固定的金属亲和层析纯化无蛋白酶的葡聚糖酶，以消化酵母细胞壁葡聚糖，随后分析蛋白质含量。第三部分讨论了早期工作操纵GPI-CWP表达以用于免疫学研究。我们显示在酿酒酵母中从鸡卵清蛋白，一种外源蛋白，GPI锚定肽的有效表面表达。这些肽是从细胞壁上亲和纯化的，显示出可引发与较大细胞壁片段不同的体外免疫反应。

著录项

  • 作者

    Trow, Jonathan A.;

  • 作者单位

    The Johns Hopkins University.;

  • 授予单位 The Johns Hopkins University.;
  • 学科 Biology Molecular.;Biology Microbiology.;Biology Cell.
  • 学位 Ph.D.
  • 年度 2013
  • 页码 104 p.
  • 总页数 104
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 eng
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