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Orexin-A对脊髓腹角神经元基本电生理参数及尼古丁电流的作用

     
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目的:研究orexin-A对脊髓腹角神经元基本电生理参数及烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的作用.方法:使用7～12 d的新生SD大鼠.麻醉后,将含有腰骶膨大的脊髓分离并切片.用木瓜蛋白酶(papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液消化切片并孵育40 min.显微镜下选取腹角,使用抛光的巴斯德吸管进行神经元的急性机械分离.对贴壁的健康神经元进行穿孔膜片钳记录.结果:①急性分离的脊髓腹角神经元状态良好,具有形状多样的胞体和完整的突起;②9个急性分离的脊髓腹角神经元有自发动作电位;③持续灌流orexin-A(OXA)2 min后,在5例细胞记录到4个脊髓腹角神经元的自发动作电位放电频率增加了(63.64±5.25)％,幅度等参数无明显变化;④在15个神经元,有12例细胞给予0.3 mmol/L尼古丁诱导出内向电流,幅度为(142.97±75.02)pA,用100 nmol/L OXA进行2 min的预处理,可显著抑制电流幅度至(69.07±61.07)pA(P<0.001),抑制率为(54.75±22.62)％;⑤在9个神经元中有7例细胞给予尼古丁诱导的电流幅度为(129.31±69.38)pA,将100 nmol/L OXA共同施用于神经元,尼古丁诱导的电流幅度降为(68.61±34.98)pA,在此基础上,通过施用orexin-1受体(OX1R)拮抗剂SB334867(10μmol/L)2 min后可阻断OXA对尼古丁诱导电流的抑制作用,电流幅值为(93.46±56.45)pA.因此,SB334867可完全取消OXA对尼古丁电流的抑制作用.但对于另两例神经元,SB334867并未阻断OXA的抑制作用.结论:Orexin-A可能通过OX1R对脊髓大部分腹角神经元的尼古丁电流具有抑制作用,但不能排除orexin-2受体(OX2R)也参与OXA作用的可能性.

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