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药用野生稻ADF基因的克隆及其抗逆性分析

         
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摘要

In order to investigate the effect of ADF gene on abiotic stress in Oryza officinalis. Based on the a-nalysis on the drought-stressed transcriptome of Oryza officinalis,OoADF1 was cloned by RT-PCR technique and se-quence analysis showed that OoADF1 contains 453 bp-length ORF and was intronless,and OoADF1 was predicted to contain 150 amino acids and have conserved ADF structure. Quantitative RT-PCR analysis showed that OoADF1 was expressed in all seven tissues, including leaf blade, leaf sheath and root at four-leaves stage, leaf blade, leaf sheath,stem and young panicle at heading stage in Oryza officinalis. The highest expression level of OoADF1 was detected in the root at four-leaves stage,while leaf sheath at heading stage. The fold of expression of OoADF1 a-mounted to 17. 9 and 40. 0 in the drought-or high NaCl-stressed young seedling,respectively. The coding sequence of OoADF1 was fused to the prokaroytic expression vector pET-28a( +), and the combinant vectors were induced by IPTG and detected by SDS-PAGE. The molecular weight of protein OoADF1 was detected to be 16 kDa,which was consistent with theoretical one. The results of stress tolerance assay showed that the recombinant strain produ-cing OoADF1 fusion protein improved the resistance to the high concentration,indicating that OoADF1 may exert a role in respond to salt stress and protect cells from high-salt harm. These results provides that OoADF1 has a certain degree of response to high salt stress,so that cells from high salt poisoning.%为了研究ADF基因对药用野生稻非生物胁迫的影响,利用药用野生稻干旱胁迫转录组数据分析的基础,通过PCR技术克隆OoADF1基因,序列分析结果表明,OoADF1的开放阅读框长度为453 bp,无内含子,编码150个氨基酸残基,具有典型的ADF结构域.qRT-PCR技术分析表明,OoADF1在四叶期的叶片、叶鞘和根,以及抽穗期的叶片、叶鞘、茎和幼穗等7个组织中均表达,四叶期根部表达量最高,抽穗期叶鞘表达量最高.干旱和高盐胁迫后,OoADF1表达量分别上调了17.9,40.0倍.将OoADF1完整的编码序列融合到原核表达载体pET-28a(+)中,通过IPTG诱导及SDS-PASGE检测表明,OoADF1编码的蛋白分子量约为16 kDa,与预测的相符.OoADF1在大肠杆菌中的表达增加了大肠杆菌对高盐的抗性,表明OoADF1对高盐胁迫具有一定程度的响应能力,从而使得细胞免受高盐的毒害.

著录项

  • 来源
    《华北农学报》 |2017年第6期|37-44|共8页
  • 作者

    李培纲; 李红梅; 张帅; 李劲松; 陈志雄; 刘向东;

  • 作者单位

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

    华南农业大学;

    亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;

    广东 广州 510642;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程（遗传工程）;
  • 关键词

    药用野生稻; 水稻; 抗逆性; ADF;

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