猪圆环病毒2型 Rep 基因真核表达载体的构建和免疫原性分析

王静; 刘成倩; 李红; 易建中; 于宗幸; 陈磊; 孙晓云

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猪圆环病毒2型 Rep 基因真核表达载体的构建和免疫原性分析

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根据 GenBank 发表的猪圆环病毒2型（PCV2）基因序列设计并合成1对特异性引物，进行 PCR 扩增，从 PCV2突变株中扩增出 PCV2 Rep 基因，对 PCR 扩增产物清洁后进行双酶切，连接到 pEGFP-C1载体上，转化到大肠杆菌 DH5α感受态细胞中，经 PCR 筛选和测序后鉴定出正确的重组基因，完成真核表达载体的构建。将重组质粒转染到 PK15细胞中，收取病毒液抽提 DNA，PCR 检测到 Rep 基因，证明转染是成功的。进行间接免疫荧光试验，可以检测 Rep 基因在 PK15细胞中的表达，试验结果很好的验证了 Rep 基因的免疫原性。这为进一步研究 PCV2的生物学活性及 PCV2新型疫苗奠定了坚实的基础。%A pair of specific primers was designed and synthesized according to the porcine circovirus type 2(PCV2)gene sequence published in the GenBank,the PCV2 Rep gene was amplified by PCR from mutant strains of PCV2,and after cleaning and double digests the amplified products were connected to the pEGFP-C1 vector and transformed into E.coli DH5αcompetent cells.The correct recombinant gene was identified by PCR screening and sequencing,indicating the construction of eukaryotic expression vector was finished.The recombi-nant plasmid was transfected into PK1 5 cells,and then the virus liquid was collected to extract the DNA.The Rep gene detected by PCR proved that the transfection was successful.The experimental results well verified the im-munogenicity of Rep gene in PK1 5 cells,thus laying a solid foundation for further study of the biological activities and new vaccine of PCV2.

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来源
《上海农业学报》 |2016年第1期|6-9|共4页
作者
王静; 刘成倩; 李红; 易建中; 于宗幸; 陈磊; 孙晓云;
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作者单位

上海海洋大学水产与生命学院;

上海 201306;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海海洋大学水产与生命学院;

上海 201306;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海海洋大学水产与生命学院;

上海 201306;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

上海海洋大学水产与生命学院;

上海 201306;

上海市农业科学院畜牧兽医研究所;

上海 201106;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪圆环病毒 2 型; Rep 基因; 真核表达载体; 间接免疫荧光;

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猪圆环病毒2型 Rep 基因真核表达载体的构建和免疫原性分析

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