在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段

李海娟; 徐玲玲

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在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段

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噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子.利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T.thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后(使杂合子纯合化)涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株.利用该系统成功敲除了T.thermophilus的TTC0340_0341基因,获得突变体的概率达到了10-2.该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用.

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来源
《江西农业大学学报》 |2019年第3期|577-583|共7页
作者
李海娟; 徐玲玲;
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作者单位

西安文理学院生物与环境工程学院;

陕西西安 710065;

西安文理学院生物与环境工程学院;

陕西西安 710065;

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正文语种 chi
中图分类 Q812;
关键词
噬热栖热菌; 多倍体; 基因无痕敲除手段;

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