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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27 双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

         

摘要

目的 构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhaneed green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达.方法 采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体.转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达.结果 经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达.结论 NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达.EGFP基因可以指示p27基因的表达情况.由NF-KB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础.

著录项

  • 来源
    《华中科技大学学报(医学版)》 |2008年第6期|708-711,封三|共5页
  • 作者单位

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R34;
  • 关键词

    核转录因子κB启动子; 双顺反子; p27基因; 真核表达载体; 细胞周期;

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