酵母表面展示分选酶底物用于分选酶活性检测

罗立新; 吴琳; 林影

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酵母表面展示分选酶底物用于分选酶活性检测

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【目的】以EGFP标签检测分选酶底物QALPETGEE在毕赤酵母表面的表达,然后将酵母表面展示的底物与分选酶相互作用以检测分选酶活性。【方法】以pcDNA-myc-his-EGFP为模板,通过PCR技术将QALPETGEE-linker-EGFP基因连接到穿梭载体pKFS上,构建QALPETGEE-linker-EGFP酵母表面展示载体后转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中。重组菌经培养,利用荧光显微镜检测重组酵母的荧光强度,然后通过荧光分光光度计检测分选酶与底物相互作用后产生游离的EGFP荧光强度进而确定分选酶的酶活。【结果】荧光显微镜下观察到重组酵母细胞表面有绿色荧光且强度随时间增强。荧光分光光度计检测表明,反应后上清游离的EGFP荧光强度由原先的187.67±2.16增加至273.47±2.14。【结论】这表明分选酶底物已成功展示在酵母表面,且为分选酶的活性检测提供了高效、经济的方法。

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来源
《微生物学报》 |2009年第11期|1534-1539|共6页
作者
罗立新; 吴琳; 林影;
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作者单位

华南理工大学生物科学与工程学院;

广州510006;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
酵母展示技术; 分选酶; 荧光分光光度计; 底物; 活性检测;

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