猪A组轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达

王春凤; 丛彦龙; 刘尚高; 李玉

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以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了1194bp的Vp6基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T Vector中,构建克隆质粒pGEM-T-Vp6.用SacⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp6和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp6基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp6.将pW425t-Vp6转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中,经生长功能弥补筛选阳性克隆,通过SDS-PAGE分析,可见约44.88kD的融合蛋白.由Western blot分析,表明该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,从而为pW425t-Vp6在乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据.

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来源
《微生物学报》 |2005年第5期|685-689|共5页
作者
王春凤; 丛彦龙; 刘尚高; 李玉;
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作者单位

吉林农业大学动物科学与技术学院,长春,130118;

中国农业大学动物医学院,北京,100094;

中国农业大学动物医学院,北京,100094;

吉林农业大学菌物研究所,长春,130118;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
轮状病毒; Vp6基因; 乳酸菌表达载体; 大肠杆菌;

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