伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)2-萘酸单加氧酶基因(nmo)的克隆及表达

方向平; 丘晓颖; 岑英华; 孙国萍

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通过酶切连接将Burkholderia sp. JT1500的一段DNA片段(4.8kb)亚克隆到表达载体pUC18上,得到重组子pEK123.测序后的pEK123重组子4.8kb插入片段的序列已经登陆欧洲EMBL基因库,序列接受号为AJ566333.对这一DNA片段的序列分析显示,此DNA片段含有3个阅读框,且在这3个阅读框5′端发现一启动子特异序列.再用酶切连接方法得到仅含一个阅读框的重组子pXK3,其阅读框长度为1158bp,编码386个氨基酸,与已报道的Ralstonia eutropha HF39羟化酶(单加氧酶,bec)氨基酸序列有64%的同源性.pEK123对2-萘酸代谢途径中4个关键底物的转化实验结果显示,其基因产物仅对2-萘酸发生加氧转化反应,而且2-萘酸浓度有明显的降低,证实此基因是2-萘酸单加氧酶基因(nmo).同时发现其基因产物也可以转化苯甲酸钠.该酶对苯甲酸的加氧转化途径正在研究中.SDS-PAGE结果表明,pXK3、pEK123两重组子中2-萘酸单加氧酶表达量并没明显区别,但加氧酶酶活却存在显著的差别.推测在启动子后,单加氧酶阅读框前的两个阅读框的基因产物,对单加氧酶活有促进作用.

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来源
《微生物学报》 |2003年第5期|599-606|共8页
作者
方向平; 丘晓颖; 岑英华; 孙国萍;
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作者单位

广东省微生物研究所,广州,510070;

广东省微生物研究所,广州,510070;

广东省微生物研究所,广州,510070;

广东省微生物研究所,广州,510070;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
2-萘酸,单加氧酶,底物;

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