恶性疟原虫PfMAg?1蛋白为裂殖子表面相关蛋白,为了探究PfMAg?1的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPR?associated protein 9,CRISPR/dCas9)技术,构建恶性疟原虫PfMAg?1低表达质粒,电穿孔方法转染后通过抗稻瘟菌素(Blasticidin S Deaminase,BSD)筛选出恶性疟原虫MAg1KD(Knock Down,KD)虫株.通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、 实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,qRT?PCR)检测PfMAg?1表达水平.在体外培养条件下观察MAg1KD虫株生长趋势及裂殖子入侵效率来评价PfMAg?1的表达对恶性疟原虫红内期增殖的影响.结果表明,恶性疟原虫MAg1 KD虫株较对照虫株的体外生长率显著降低,进一步实验提示影响疟原虫增殖速度的原因是MAg1 KD虫株裂殖子入侵效率下降.本研究证实PfMAg?1在恶性疟原虫裂殖子入侵红细胞时发挥重要作用,为进一步评价PfMAg?1蛋白作为疟疾疫苗候选抗原的前景提供了实验依据.
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