• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文期刊> 《寄生虫与医学昆虫学报》 >荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)

荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)

         
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蚊Culex pipiens pallens钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3′端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS,SR,RR 3种基因型.用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型,42个样本检测结果与等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测结果完全一致,得到SS(TTA/TTA)基因型21个,占50.0%,SR(TTA/TTT)基因型16个,占38.1%,RR(TTT/TTT)基因型5个,占11.9%,与测序结果完全一致;另外6个样本检测结果与AS-PCR检测结果不一致,测序显示:TCA(L1014S)、TTC(L1014F)突变各1株,另4株为敏感纯合子.因此,PCR SYBR GREEN 扩增灵敏度(93.75%)低于AS-PCR法(100%),但特异性较高,达100%;分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高,影响了引物的结合,而AS-PCR凭经验能完成部分结果的判断.综上所述,用PCR SYBR GREEN 扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法.%To set up a real-time fluorescent quantitative PCR assay for rapid detection point mutation ( TTA-TTT of L1014F) in Culex pipiens pallens sodium channel gene-related with knockdown resistance ( kdr) . Two paired-primers with 3 '-basyl of sense-primer comhined on the mutation point were contrived in parallel for each specimen. The specimens can be easily genotyped as SS, RS, RR as same as the AS-PCR did when there was no polymorphism in the target sequence complemented with primers. Of 48 specimens were detected in this assay , 42 specimens showed the same results as AS-PCR did gaining 21 SS genotypes (50. 0％ ) , 16 SR genotypes (38. 1％ ) and 5 RR genotypes ( 11. 9％ ) . There were 2 of other 6 specimens showed substitutions from TTA to TGA and TTC in the allele of L1014 , and 4 SS genotypes in other 4 specimens with polymorphism in the target sequence according to sequencing results. So in brief, the PCR assay showed lower sensitivity (93. 75％ ) than AS-PCR did ( 100％ ) , but higher specificity ( 100％ ) according to direct sequencing.

著录项

  • 来源
    《寄生虫与医学昆虫学报》 |2011年第3期|156-160|共5页
  • 作者

    谭伟龙; 董言德; 王忠灿; 李春晓; 汪中明; 赵彤言;

  • 作者单位

    军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    南京军区疾病预防控制中心,南京,210002;

    军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    南京军区疾病预防控制中心,南京,210002;

    军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    荧光定量PCR; 淡色库蚊; 击倒抗性; 钠通道;

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号