白纹伊蚊CYP6N3基因启动子序列的分子克隆与功能分析

周国理; 黄炯烈; 吴瑜; 王玲

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根据本室已获得的白纹伊蚊CYP6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的5′-末端核苷酸序列,设计2个反向特异引物(GSP1和GSP2),利用4种限制性内切酶Dra Ⅰ、EcoR Ⅴ、Pvu Ⅱ和Stu Ⅰ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA,消化产物与适配子连接产生4种消化的DNA库,并分别以此为模板,进行基因步移.用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第1步PCR扩增,然后再以第1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第2次PCR扩增.将扩增产物进行T-A克隆及测序.结果显示:分别以Dra Ⅰ、EcoR Ⅴ、Pvu Ⅱ和Stu Ⅰ消化的DNA库为模板而获得4个长短不一的DNA序列:806bp、2 190bp、3 076bp和2 206bp,它们均包括有CYP6N3全长cDNA5′-非翻译区序列及氨基端开头10个氨基酸的编码序列;在其ATG上游序列中均存在有若干个典型的TATA盒、Barbie盒和/或CCAAT盒、抗氧化剂反应元件或外源化合物反应元件.表明本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3基因4个上游启动子区序列,并分析、讨论了它们在蚊虫中细胞色素P450基因多样性及其参与杀虫剂抗性中的作用.

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来源
《寄生虫与医学昆虫学报》 |2002年第1期|12-20|共9页
作者
周国理; 黄炯烈; 吴瑜; 王玲;
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作者单位

中山医科大学寄生虫学教研室,广州,510080;

中山医科大学寄生虫学教研室,广州,510080;

中山医科大学寄生虫学教研室,广州,510080;

中山医科大学寄生虫学教研室,广州,510080;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医学寄生虫学;
关键词
基因步移; 白纹伊蚊; 细胞色素P450; CYP6N3; 启动子;

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