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用β-escin穿孔膜片箝技术记录豚鼠心室肌细胞L-型钙电流

机译：用β-escin穿孔膜片钳技术记录豚鼠心室肌​​细胞L-型钙电流

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AIM: To establish a perforated patch recording (PPR) mode with β-escin and compare L-type calcium current (Ica,L)recorded under PPR and normal whole-cell recording (WCR) condition in isolated guinea-pig ventricular myocytes. METHODS: Single myocytes were dissociated by enzymatic dissociation method. Β-escin was added to the pipette solution to perforate the cell membrane and obtain PPR mode. Ica,L was recorded using PPR and WCR techniques. RESULTS: β-Escin 20, 25, and 30 μmol/L could permeabilize the cell membrane and obtain PPR mode. With β-escin 25 μmol/L, the success rate was highest (16/17, 94 %) and the time required for permibilization was 2-15 (8+4) min. Run-down of Ica,L was considerably slower in PPR than in WCR condition. The amplitude of Ica,L was decreased by 36 % at 20 min after the formation of WCR, while it was slowly decreased by 8 % at 30 min after the formation of PPR. The current-voltage relation (I-V) curves, activation and inactivation curves of Ica,L were not significantly different between WCR and PPR. The inactivation rate of Ica,L was slower in PPR than in WCR, the faster inactivation time constant (τf) was longer in PPR than in WCR at membrane potentials of -20 mV - +10 mV (n=6, P＜0.05), and the slower time constant (τs) was also longer in PPR than in WCR at membrane potentials of-10 mV - +10 mV (n=6, P＜0.05). There was no significant difference between the activation rate in WCR and PPR. CONCLUSION: Using β-escin 25 μmol/L can easily obtain stable PPR in isolated guinea-pig ventricular myocytes, and this method is useful in dealing with channels, which show run-down under normal WCR such as L-type Ca channel.%目的:用β-e sci n在豚鼠心室肌细胞建立穿孔膜片箝技术(PPR),并记录L-型钙电流(ICa,L),与传统的全细胞记录(WCR)模式相比较.方法:用酶消化法分离单个心室肌细胞,将β-escin配在电极内液中穿孔心室肌细胞膜形成PPR模式.用WCR及PPR技术记录心室肌细胞ICa,L.结果:β-escin 20,25,30 μmol/L可在心室肌细胞膜穿孔形成PPR模式,用β-escin 25 μmol/L成功率最高(16/17,94%).用PPR模式记录的ICa,L其衰减明显比WCR方式记录的慢,ICa,L幅值在WCR形成后20 min减小36%,而在PPR形成后30 min仅缓慢减小8%.在两种模式下,ICa,L的I-V曲线,激活和失活曲线无显著差异.在PPR模式下,ICa,L的失活速率比在WCR模式下慢,在-20 mV-+10 mV电压下,其快失活相时间常数(τf)比WCR长(n=6,P＜0.05),在-10 mV-+10 mV电压下,其慢失活相时间常数(τs)也比WCR长(n=6,P＜0.05).在两种方式下,ICa,L的激活速率无显著差异.结论:用β-escin 25 μmol/L在豚鼠心室肌细胞能得到较稳定的PPR模式,此方法可以用于在普通的WCR模式下衰减较明显的电流如L-型钙电流的记录.
机译：目的：建立具有β-ESCIN的穿孔补丁记录（PPR）模式，并比较分离的豚鼠心室肌​​细胞的PPR和正常全细胞记录（WCR）条件下记录的L型钙电流（ICA，L）。方法：通过酶解离方法解离单个肌细胞。将β-esc in加入移液管溶液中以穿孔细胞膜并获得PPR模式。使用PPR和WCR技术记录ICA，L。结果：β-ESCIN 20,25和30μmol/ L可以透露细胞膜并获得PPR模式。对于β-ESCIN25μmol/ L，成功率最高（16/17,94％），但脂合金所需的时间为2-15（8 + 4）分钟。在PPR的ICA倒闭比WCR条件相当慢。在形成WCR后20分钟，ICA，L的幅度在20分钟后降低了36％，而在形成PPR后30分钟将在30分钟缓慢下降8％。 ICA，L的电流 - 电压关系（I-V）曲线，激活和灭活曲线在WCR和PPR之间没有显着差异。 ICA，L的灭活率在PPR中比WCR较慢，PPR的速度较快的失活时间常数（τf）比-20mV - + 10mV的膜电位在WCR中（n = 6，p <0.05）。 ，并且PPR的较慢的时间常数（τs）也比在-10mV - + 10mV的膜电位的WCR中更长 - +10mV（n = 6，P <0.05）。 WCR和PPR中的活化率之间没有显着差异。结论：使用β-ESCIN25μmol/ L可以容易地在分离的豚鼠心室肌​​细胞中获得稳定的PPR，并且该方法可用于处理频道，其在正常WCR下显示掉落，如L型Ca通道。％ - - 用β-e SCI N在豚鼠心室肌​​细胞建立穿膜片钳细胞建立膜膜技建立建立孔膜钙钙ー穿孔膜钙穿穿膜膜记录记录穿膜膜记录记录孔孔膜记录记录孔孔ーーーー模式ー记录（WCR）。方法：供给液化法分析单位室肌细胞，将β-escin配在电气内液中穿心心室肌膜及ppr模式。用wcr及ppr模式。用wcr及ppr模式。用wcr及ppr模式。用途及ppr模式。用细胞in ica inca，l。结果：β-escin 20,25 ，30μmol/ l可在心室肌细胞膜穿孔成PPR模式，用β-ESCIN25μmol/ L成成因最高（16 / 17,94％）。用PPR模式记录的ICA，L其衰减明显比WCR方便的慢，ica，l幅值在wcr形成后20min减小36％，而在ppr成成后30 min仅缓慢减小8％。在两两模式下，ICA，L的IV绕线，激活和失活在PPR模式下，ICA，L的失活速率比中，在-20 mv- + 10 mv电脑下，其快失活相时隙数（τf）比wcr长（n = 6，P <0.05），在-10 mV- + 10 mV电气下，其慢其慢相时间阶数（τs）也也wcr长（n = 6，p <0.05）。在两种方向下，ICA ，l的激活速率无显着差异。结论：用β-escin25μmol/ l在豚鼠心室肌​​细胞能得到较的ppr模式，此方法可口用在普通通的wcr模式下衰减较明媚的电影如l - 型钙电阻的记录。

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