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微小RNA-204-3p通过靶向调控Krüppel样因子6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

         
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目的 探讨微小RNA-204-3p(miR-204-3p)对高糖诱导小鼠足细胞MPC5损伤的保护作用及其分子机制.方法 采用高糖(30 mmol/L D-葡萄糖)处理MPC5细胞.实时定量PCR(qPCR)检测细胞中miR-204-3p与锌指蛋白Krüppel样因子6(KLF6)mRNA水平.MPC5细胞分为NG组(正常对照),HG组(高糖刺激),HG+miR-204-3p组、HG+miR-NC组、HG+si-KLF6组、HG+si-NC组,HG+miR-204-3p+pcDNA-KLF6组和HG+miR-204-3p+pcDNA组.蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析miR-204-3p和KLF6的靶向关系.结果 与正常对照相比,高糖可显著降低MPC5细胞中miR-204-3p表达量[(0.41±0.04)比(1.02±0.08)],上调KLF6 mRNA[(2.86±0.27)比(1.03±0.08)]和蛋白[(0.89±0.08)比(0.46±0.04)]水平,还可上调KLF6、desmin[(0.81±0.07)比(0.34±0.03)]、Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率[(22.46±2.08)％比(5.26±0.64)％],下调synaptopodin蛋白[(0.34±0.03)比(0.76±0.07)]及Bcl-2蛋白表达量(P<0.05).与HG+miR-NC组比较,HG+miR-204-3p组明显提高synaptopodin[(0.67±0.06)比(0.32±0.03)]及Bcl-2蛋白水平,降低desmin[(0.41±0.04)比(0.83±0.08)]、Bax、cleaved-caspase-3蛋白水平及细胞凋亡率[(11.25±1.65)％比(24.58±2.47)％](P<0.05).与HG+si-NC组比较,HG+si-KLF6组明显提高synaptopodin[(0.62±0.06)比(0.28±0.03)]及Bcl-2蛋白水平,降低desmin[(0.49±0.05)比(0.86±0.08)]、Bax蛋白水平及细胞凋亡率[(14.69±1.87)％比(25.47±2.68)％](P<0.05).miR-204-3p直接靶向KLF6.与HG+miR-204-3p+pcDNA组比较,HG+miR-204-3p+pcDNA-KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足MPC5细胞中KLF6、desmin[(0.68±0.06)比(0.36±0.04)]、Bax蛋白表达量和细胞凋亡率[(18.41±1.67)％比(11.05±1.02)％],显著减少synaptopodin蛋白[(0.38±0.03)比(0.69±0.07)]和Bcl-2蛋白表达量(P<0.05).结论 miR-204-3p通过直接靶向KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤.

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