重组牛粒细胞集落刺激因子的纯化鉴定及对小鼠的安全性评价

石青青; 孙珊珊; 李丽琴; 宋秀梅; 于海超; 程雪娇; 王建

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[目的]评价重组牛粒细胞集落刺激因子(recombinant bovine granulocyte colony stimulating factor,rbG-CSF)的安全性,为后期rbG-CSF临床应用价值的研究打下基础。[方法]采用rbG-CSF重组大肠杆菌,经过发酵、纯化后获得rbG-CSF;利用SDS-PAGE法对目的蛋白进行鉴定;应用BCA法测定目的蛋白浓度。急性毒性试验使用健康昆明小鼠112只,分为8组,雌雄各半,将8组小鼠分为肌肉注射组和腹腔注射组,肌肉注射组和腹腔注射组分别设有1个对照组和3个剂量组,3个剂量组注射rbG-CSF的剂量分别是150、75、37.5μg/只,对照组注射生理盐水,给药后每隔3 d进行1次称重,持续观察14 d,给药后14 d对各组小鼠进行剖检,取肝、脾、肾、生殖器官进行脏器系数测定和病理切片观察。慢性毒性试验使用健康昆明小鼠160只,分组与急性毒性试验相同,注射rbG-CSF的剂量分别是15、10、5μg/只,每周注射1次,每周注射的第6天进行1次称重,持续注射12周,第12周给药后7 d对小鼠进行剖检,处理方法同急性毒性试验。[结果]rbG-CSF纯化成功,经SDS-PAGE法鉴定目的蛋白大小为21.5 kDa,与设计大小一致;测得目的蛋白浓度为302.19μg/mL,可满足后期安全性试验所需浓度要求;急性毒性试验和慢性毒性试验中,小鼠的体重和脏器指数经SPSS 20.0单因素方差分析,剂量组与对照组相比均无显著差别;剖检各器官未出现明显病变;HE染色切片观察,各剂量组与对照组不存在显著变化。[结论]该试验建立的纯化鉴定rbG-CSF的方法可行,rbG-CSF在试验浓度下对小鼠并未造成器质性的伤害。

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来源
《畜牧与饲料科学》 |2022年第3期|8-15|共8页
作者
石青青; 孙珊珊; 李丽琴; 宋秀梅; 于海超; 程雪娇; 王建;
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作者单位

天津市中升挑战生物科技有限公司;

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正文语种 chi
中图分类 S859.797;
关键词
重组牛粒细胞集落刺激因子; 纯化鉴定; 安全性; 毒性试验;

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