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铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的原核表达、纯化及免疫保护作用研究

         

摘要

铜绿假单胞菌外膜蛋白OprⅠ具有较强的免疫原性,在疫苗上具有开发前景.利用分子方法获得OprⅠ蛋白的表达菌株.Western blotting验证表明抗体能与OprⅠ蛋白特异性结合.SDS-PAGE电泳切胶纯化获得OprⅠ蛋白.将OprⅠ蛋白免疫小鼠并攻毒铜绿假单胞菌,发现OprⅠ蛋白激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到57.14%,与对照组相比较达到显著性.采用正交试验设计,获得OprⅠ菌株最佳诱导表达条件为:加IPTG菌夜OD600值0.8,加IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8h,诱导温度28℃;菌株最佳培养条件为转速230 r/min,葡萄糖浓度0%,装液量50 mL.

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