利用染色质免疫共沉淀技术确定转录因子RIN调控的靶基因

李玲; 傅达奇; 朱毅; 田慧琴; 罗云波; 朱本忠

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利用染色质免疫共沉淀技术确定转录因子RIN调控的靶基因

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以粉红期番茄果实为材料,用含不同浓度甲醛的缓冲液交联DNA和蛋白质,利用超声波将其染色质随机断裂成大小为200-1 000 bp的片段,用RIN蛋白的特异性抗体免疫沉淀与RIN蛋白结合的DNA片段,然后解交联和纯化DNA片段,最终用普通PCR试验和测序验证与转录因子RIN结合的DNA序列.结果表明,适用于番茄果实的最佳ChIP试验条件为:用1％甲醛溶液交联DNA和蛋白质的复合物；用20％功率,工作6s,间隔10s,脉冲3次超声破碎该复合物,可以得到适当大小的片段,用于后续的试验.普通PCR和测序验证结果证明转录因子RIN与LeACS2和LeACS4启动子区域的CArG box序列结合.

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来源
《生物技术通报》 |2011年第12期|166-170|共5页
作者
李玲; 傅达奇; 朱毅; 田慧琴; 罗云波; 朱本忠;
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作者单位

天津农学院食品科学系,天津300384;

中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083;

中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083;

中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083;

中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083;

中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
染色质免疫共沉淀技术; 转录因子RIN; LeACS2基因; LeACS4基因; 番茄果实;

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