增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列.为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5'端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3'端后面插入一段多克隆位点,威功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体.通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体.用舍有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光.这一结果表明,融合蛋白DFL::EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能.
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