鼠OAZ1基因的真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

刘梦瑶; 韩钰; 蔡富强; 何玲; 王艳林

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构建鼠OAZ1基因真核表达质粒,观察OAZ1-GFP融合蛋白在绿猴肾细胞COS7中的表达.利用RT-PCR的方法获得鼠OAZ1基因,再利用重叠延伸PCR缺失掉OAZ1序列中的205位碱基T,由此获得无需阅读框移码即可编码全长OAZ1的突变基因.将此突变基因克隆入真核表达载体pEGFP-N1获得重组质粒pEGFP-N1-OAZ1-T.将此质粒瞬时转染COS7后,采用RT-PCR,Western blotting,免疫荧光技术现察检测目的基因的表达情况.结果显示,酶切和测序证明质粒pEGFP-N1-OAZ1-T构建正确,转粢COS7细胞后,OAZ1-GFP融合蛋白能在细胞中高效表达.成功构建了pEGFP-N1-OAZ1-T真核表达质粒,在COS7细胞内,该质粒能成功指导OAZ1-GFP融合蛋白合成.

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来源
《生物技术通报》 |2010年第9期|173-176180|共5页
作者
刘梦瑶; 韩钰; 蔡富强; 何玲; 王艳林;
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作者单位

三峡大学医学院,三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学医学院,三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学医学院,三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学医学院,三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学医学院,三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

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正文语种 chi
中图分类基础医学;
关键词
OAZ; 多胺代谢; 融合蛋白; 真核表达;

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