lysC定点突变及lysC、asdA串联表达对谷氨酸棒杆菌L-苏氨酸积累的影响

黄勤勤; 王慧梅; 梁玲; 黄钦耿; 吴松刚; 黄建忠

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lysC、asdA基因分别编码的天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)和天冬氨酸半醛脱氢酶(Aspartate semi-aldehyde dehydrogenase,ASD)是L-苏氨酸合成途径中两个关键限速酶基因,其中AK受到代谢产物赖氨酸与苏氨酸的协同抑制.以选育获得的一株谷氨酸棒状杆菌T11(Corynebacterium glutamicum T11)为出发菌株,通过构建lysC-asdA串联表达盒,并对其关键限速酶基因lysC进行定点突变,突变位点为Ala279Thr,获得抗反馈抑制突变型编码基因lysCr-asdA,将其插入含强启动子tac的穿梭表达载体pZ8-1中成功构建串联表达质粒pZ8-1-lysCr-asdA转化出发菌株,筛选获得工程菌株T11/pZ8-1-lysCr-asdA.摇瓶发酵其L-苏氨酸产量达到7.18 g/L,较出发菌株提高27.8％.进一步的30 L发酵罐补料分批发酵结果显示,发酵60 h L-苏氨酸产量达65.5 g/L,糖酸转化率达到39.5％,较出发菌株分别提高29.5％和33.9％,为后续的进一步构建高产L-苏氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌株提供强有力的基础.

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来源
《生物技术通报》 |2019年第2期|93-100|共8页
作者
黄勤勤; 王慧梅; 梁玲; 黄钦耿; 吴松刚; 黄建忠;
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作者单位

福建师范大学生命科学学院福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福州 350117;

福建师范大学生命科学学院福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福州 350117;

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福建师范大学生命科学学院福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福州 350117;

福建师范大学生命科学学院福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福州 350117;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
L-苏氨酸; 谷氨酸棒状杆菌; 天冬氨酸激酶; 天冬氨酸半醛脱氢酶; 共表达;

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