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土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用

         

摘要

旨在应用环介导恒温扩增技术(LAMP)检测土拉弗朗西斯氏菌.针对土拉弗朗西斯氏的FopA基因设计LAMP引物,优化LAMP反应条件,并对其特异性、灵敏度进行评价.结果显示,(1)对12种细菌和蜱的DNA(含大量假单胞菌属细菌)进行LAMP扩增,仅土拉弗朗西斯氏菌发生了扩增反应;(2)土拉弗朗西斯氏菌纯培养物检出限为4.9×102 pg/mL;克隆株质粒检出限为10 copies/μL,低于普通PCR的最低检出值1×103 copies/μL;(3)土壤模拟样本检出限为44 CFU/g;(4)和进口荧光定量PCR试剂对比检测24份(8个稀释度)土拉弗朗西斯氏菌污染土壤样本,在灵敏度范围内,均能准确检测.LAMP技术检测土拉弗朗西斯氏菌特异性强、灵敏度高、高效,对土拉热的病原学诊断具有应用价值.

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