醇脱氢酶KpADH的127位点对催化活性和对映选择性的影响

朱诚; 许国超; 戴威; 周婕妤; 倪晔

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cqvip:醇脱氢酶可用于合成手性化合物,在医药、材料等领域应用广泛。来源于多孢克鲁维酵母(Kluyveromyces polysporus)的醇脱氢酶KpADH同时具有还原(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲酮(CPMK)和氧化异丙醇、1,4-丁二醇的活性。通过分子对接和结构分析,发现Y127是紧靠底物的关键位点。本文通过对127位点定点饱和突变来提高催化活性和对映选择性,突变体Y127V和Y127I还原CPMK的比活力达到95.0U/mg和84.0U/mg,分别是野生型的6.5倍和5.8倍,突变体Y127L催化CPMK生成(R)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇[(R)-CPMA]的e.e.值由82%提高到99.2%。同时,127位点的突变提高了对醇类底物的氧化活性,突变体Y127I对异丙醇的比活力是野生型的1.46倍,而Y127C更青睐于对1,4-丁二醇的催化氧化,其比活力是野生型的3.00倍。分子间作用力分析表明,Y127L与底物CPMK间增加的氢键和π-π作用力稳定了底物构象,进一步提高了还原CPMK的对映选择性。本文为醇脱氢酶KpADH的分子改造和机制解析提供了指导,提高了该酶的工业应用潜力。

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来源
《化工进展》 |2019年第12期|5504-5511|共8页
作者
朱诚; 许国超; 戴威; 周婕妤; 倪晔;
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作者单位

江南大学生物工程学院江苏无锡214122;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类氧化还原酶;
关键词
醇脱氢酶; 定点饱和突变; 比活力; 对映选择性; 生物催化;

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