醇脱氢酶

摘要： 为探究黄金茶红茶在萎凋、揉捻、发酵等加工工序中β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,β-GC)、醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)、脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)和主要香气成分的动态变化,该研究以黄金茶一芽二叶为原料,按照红茶工艺进行加工,测定其加工过程中β-GC、ADH、LOX的活性及香气组分的变化规律。结果表明,β-GC、ADH、LOX 3种酶的活性均在萎凋工序中达到最高,随后在揉捻和发酵工序中持续下降;共检测到263种香气组分,包括53种醇、53种烯烃、70种烷烃、36种酯、14种酮、17种醛和20种其他类化合物,其中醇类和酯类物质的相对含量均远高于其他香气种类。此外,相对含量较高的香气组分有苯乙醇、香叶醇、反式-橙花叔醇、芳樟醇、水杨酸甲酯、(4 E)-4 E-己酸己酯、二氢猕猴桃内酯、苯甲醛、反-2-辛烯醛、庚二烯醛、β-环柠檬醛、α-法尼烯、(-)-α-荜澄茄油烯、顺茉莉酮、β-紫罗酮等,且黄金茶红茶香型可能属于芳樟醇及其氧化物主导型香型。该研究结果丰富了黄金茶红茶风味品质的化学基础理论,并为生产优质黄金茶红茶提供了科学依据。

摘要： 为研究酒类混合发酵过程中正丁醇的产生规律及建立调控正丁醇含量的方法,以酒曲和酒醅为样品,利用LB培养基分离菌株,吸光值法和气相色谱法测定菌株对正丁醇催化的减少量,从中筛选能够在乙醇存在条件下催化正丁醇的微生物,并对该微生物所产酶的性质进行初步研究.结果显示,所筛得编号为DQ-54的细菌属肠杆菌属(Enterobacter sp.),其产生的酶(Ec-54ADH)能够在含有5.00％乙醇溶液中转化正丁醇为正丁醛,且随着乙醇浓度的增加(0％～25％),Ec-54ADH对正丁醇的特异性改变,催化能力显著降低(p0.05).另外,在乙醇存在条件下(3.00％),当pH值为7.0和温度为40°C时,Ec-54ADH具有最高催化正丁醇活性,添加金属离子(Fe2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+和Cu2+)能够抑制Ec-54ADH对正丁醇催化活力.

摘要： (S)-N-Boc-3-羟基哌啶((S)-NBHP)是治疗套细胞淋巴瘤药物——依鲁替尼的关键手性中间体.利用醇脱氢酶催化N-Boc-3-哌啶酮(NBPO)的不对称还原是最具开发潜力的(S)-NBHP合成方法.对醇脱氢酶库进行筛选发现,来源于多孢克鲁维酵母的KpADH对NBPO具有最佳的催化效果,纯酶活力高达83.9 U/mg,产物对映体过量值为97.0％(S).将其与葡萄糖脱氢酶偶联,并考察了单水相、两相、离子液体和不同底物浓度对转化反应的影响.结果表明:高浓度产物(S)-NBHP对KpADH存在抑制作用,抑制动力学分析表明属于非竞争性抑制.采用单水相体系可降低(S)-NBHP对KpADH催化反应的抑制,有利于转化效率的提高.初步探究了醇脱氢酶催化NBPO不对称还原反应的抑制现象,对酶法合成(S)-NBHP具有指导意义.

摘要： 以聚丙烯酸(PAA)改性的聚乙烯(PE)膜为载体,研究了醇脱氢酶(ADH)的两种固定化路线,并以甲醛为底物考察了固定化酶的催化性能.路线1用聚乙烯亚胺(PEI)进一步改性,使用戊二醛(GA)固定化ADH.最优固定化pH为6.0,温度为5～15°C,酶浓度为1.0 mg/ml,GA浓度为0.01％(质量);固定化酶的最适反应pH为6.5,温度为15～30°C,反应速率最高为9.6μmol/(L·min);重复利用10次后可保持47.3％的活性.路线2以PAA-PE为载体,用1-(3-二甲氨基丙基)-2-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为活化剂,固定化ADH.EDC和NHS最优摩尔比为1:0.5,固定化时间为24 h;固定化酶的最适反应pH为6.5,温度为20～37°C,反应速率为15.58μmol/(L·min);重复利用10次后可保持53.8％的活性.

摘要： 本发明提供了能够将乙酰辅酶A转化为克罗伊醇的微生物,以及单独或与丙酮和/或异丙醇组合生产克罗伊醇的发酵方法。微生物可以被遗传工程来表达和/或破坏下列酶中的一种或多种:乙醛脱氢酶、醇脱氢酶、双官能乙醛/醇脱氢酶、醛氧化还原酶、磷酸转乙酰酶、乙酸激酶、Co A转移酶A、Co A转移酶B、乙酰乙酸脱羧酶.

摘要： 本发明提供了能够将乙酰辅酶A转化为克罗伊醇的微生物,以及单独或与丙酮和/或异丙醇组WO/2018/102125生产克罗伊醇的发酵方法。微生物可以被遗传工程来表达和/或破坏下列酶中的一种或多种:乙醛脱氢酶、醇脱氢酶、双官能乙醛/醇脱氢酶、醛氧化还原酶、磷酸转乙酰酶、乙酸激酶、CoA转移酶A、CoA转移酶B、乙酰乙酸脱羧酶;仲醇脱氢酶、丁酰辅酶A脱氢酶(BCD)和/或反式-2-烯醇辅酶A还原酶(TER)。

摘要： 他汀类药物是目前应用最广泛、效果最理想的降脂药物.生物催化法合成他汀类药物手性侧链以其低排放、对环境低污染等优点被运用于工业生产,其中醇脱氢酶是该生物催化过程中的关键酶.本文以构建重组脱氢酶基因工程菌为目的,通过PCR扩增目的基因,连接到表达载体pET-28b上并导入BL21中,成功构建重组脱氢酶基因工程菌BL21-pET28b-S288C,并实现可溶性表达,为今后进一步的研究奠定了基础.

摘要： 【据《Hepatology》2018年11月报道】题:HSD17B13是一种与非酒精性脂肪性肝病组织学特征相关的肝视黄醇脱氢酶(作者MaYL等)非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是慢性肝病的一种常见原因。一种单核苷酸多态性(SNP)rs6834314与一般人群中的血清肝酶相关,可能反映了肝脏脂肪样变或损伤程度。笔者团队研究了rs6834314及其最近的基因HSD17B13(17-β羟基类固醇脱氢酶13),以鉴定其与NAFLD组织学特征的关联,并表征HSD17B13在NAFLD发病机制中的作用。

摘要： 目的 观察葛黄颗粒对酒精性肝病大鼠醇脱氢酶(ADH)、醛脱氢酶(ALDH)及细胞色素P4502E1(CYP4502E1)活性的影响.方法 白酒灌胃加普通饲料饮食复制酒精性肝病大鼠,复制成功后,白酒灌胃继续,除模型组外,葛黄颗粒高、中、低剂量干预组同时分别给予不同浓度的葛黄颗粒灌胃,正常组一直采用相同剂量蒸馏水灌胃,13周后处死大鼠,行肝组织HE染色、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、ADH、ALDH含量检测,Western blot检测肝CYP4502E1蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组的肝脏指数、肝功能指标、ADH及CYP4502E1均升高(P<0.01),而ALDH却降低(P<0.01);与模型组比较,不同剂量(高、中、低)葛黄颗粒干预组均可逆转以上检测指标,且存在一定的量效关系,即高、中剂量组逆转效果较好(P<0.01).结论 一定剂量葛黄颗粒可通过调节ADH等乙醇代谢酶活性延缓或逆转酒精性肝损伤的发生.

摘要： 红串红球菌(Rhodococcus erythropolis)中的醇脱氢酶(ADH)属中链脱氢酶家族,是一种依赖NADH、专一生成S 型产物的醇脱氢酶,在NADH的帮助下,可以催化苯乙酮生成( S )-苯乙醇,和Lactobacillus kefir中的R 型醇脱氢酶一起,为实现手性芳香醇的工业化生产,提供了可能性.本研究中,用PCR 扩增出红串红球菌Rhodococcus erythropolis ATCC4277 中的醇脱氢酶基因(ReADH),长度1047 bp.构建了pet22b-ADH的表达载体,以BL21(DE3)为宿主进行表达,获得了较好的脱氢酶的重组菌.采用自诱导培养基,以乳糖为诱导剂对重组菌进行培养,15 °C诱导48 h 后检测酶活,结果得到的重组菌诱导后表达的pet-adh的比酶活为1.4 U/mg,比之前报道的酶活有所提高.同时发现在培养基中添加锌离子以及木糖对产酶是有帮助的.

摘要： 将二氧化硅纳米管掺杂于海藻酸凝胶中制备得到海藻酸-二氧化硅纳米管（ALG-SiNTs）杂化凝胶，二氧化硅纳米管在海藻酸凝胶网络中均匀分布。并将海藻酸凝胶（ALG）和ALG-SiNTs 杂化凝胶用于醇脱氢酶固定化。研究表明，ALG-SiNTs 凝胶固定化酶的包埋率为83.8±2.5﹪，明显优于ALG 凝胶包埋酶的包埋率68.4±3.9﹪。并且，包埋于ALG-SiNTs 杂化凝胶的醇脱氢酶的活性保持率、酶促反应动力学常数、固定化酶操作稳定性和储存稳定性都大大优于ALG 凝胶固定化的醇脱氢酶。另外，掺杂后二氧化硅纳米管后凝胶的机械幅度有较大程度提高。

摘要： 作者在研究中发现细菌CCTCC203010和酵母CCTCC203011两菌株具有高效立体选择性转化外消旋苯基乙二醇得到(S)-苯基乙二醇的能力,并对两菌株的醇脱氢酶进行了分离纯化工作.

摘要： 目的:构建醇脱氢酶(ADH)和甲酸脱氢酶(FDH)共表达的重组大肠杆菌,实现其对羰基化合物的不对称还原;对这两个在催化过程中的关键酶进行结构改造,以期提高全细胞催化效率.rn 方法:首先根据大肠杆菌密码子优化的原则将短乳杆菌(Lactobacillus brevis)来源的ADH和博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)来源的FDH的基因分别进行密码子优化,构建出共表达ADH和FDH的重组大肠杆菌,利用诱导表达后的双酶共表达重组大肠杆菌对苯乙酮进行全细胞转化,用生物信息学的方法分析ADH和FDH的结构特点,采用柔性结构或刚性结构对ADH和FDH进行串联实现融合蛋白的可溶表达,探索全菌催化体系的优化方案.rn 结果:诱导表达后的双酶共表达重组大肠杆菌对苯乙酮进行全细胞转化的转化率显著高于双菌双酶的催化效率，FDH C一端无序结构在酶活性发挥中起着重要作用，酶活测定结果表明以FDH-linker-ADH方式串联后的酶活性最高。rn 结论:本研究提示通过连接肽的合理设计，能够实现ADH及FDH的串联双功能蛋白的可溶性表达，实现高效率的前手性淡基化合物到手性醇的全细胞转化。本文在合成生物学层面，为手性醇生物转化方法的优化提供重要参考，并为新型生物催化体系的开发提供新的思路和方法。

摘要： 构建具备NAD+/NADh再生能力的双重组菌耦合体系(表达甲酸脱氢酶的E. Coli BL21(DE3)/pET 28a(+)-fdh和表达醇脱氢酶的E. Coli BL21(DE3)/pET 28a(+)-adh),分别研究了两者的培养条件、前者的高细胞密度培养以及后者的分离纯化。重组菌E. Coli BL21(DE3)/pET 28a(+)-fdh优化后的发酵培养基为:Na2hPO4·7h2O 13 g.L-1,NaCl 0.5 g.L-1L,Kh2PO4 3 g.L-1,Nh4Cl 3.5 g.L-1，MgSO4 0.2 g.L-1,葡萄糖10 g.L-1,微量元素2 ml.L-1。重组菌E. Coli BL21(DE3)/pET 28a(+)-fdh高密度培养研究发现,以葡萄糖浓度为指标的分批补料,发酵液的OD600值达到83,酶活为11.9 U.ml-1；而以pH为指标的ph-stat法葡萄糖流加方式补料,发酵液的菌体密度有所提高，OD600达到98,酶活为12.1 U.ml-1。重组菌E. Coli BL21(DE3)/pET 28a(+)-adh粗酶液经Ni-NTA Agarose亲和层析、Sephedex G-25 medium凝胶过滤和冷冻干燥得到纯酶Adh,比酶活提高5.62倍,为6.57 U.mg-1。

摘要： 本文主要研究了游离和固定化醇脱氢酶酶促反应的动力学。游离和固定化醇脱氢酶酶促反都符合Daziel双底物酶促反应动力学模型,但是固定化后的酶活为同条件下游离酶活性的50～60％.固定化酶能重复使用5次以上。

摘要： 按窝组法将实验小鼠分为对照组,乙醇组,醒酒发酵乳饮料+乙醇组,醒酒发酵乳饮料组四组.通过测定不同组小鼠肝/体重百分比及肝匀浆提取液中醇脱氢酶(ADH)、谷胱甘肽转移酶(GST)和SOD酶的活性,探讨了该醒酒发酵乳饮料的醒酒机理.结果表明,摄入乙醇前灌给该醒酒发酵乳饮料能增强小鼠脏脏中ADH、GST和SOD酶的活性,促进乙醇在体内的代谢,具有一定的保肝作用.

摘要： 谷氨酸棒状杆菌(简称谷棒杆菌,Corynebacterium glutamicum)是生产氨基酸、维生素等多种化学品的重要工业微生物菌种.近期研究发现谷棒杆菌能够降解以对甲酚(p-cresol)为代表的多种芳香族化合物,展现出其在治理芳烃环境污染方面的潜力.基于前期从谷棒杆菌ATCC13032中鉴定的对甲酚生物降解相关基因簇“cre”,通过体外实验对该基因簇编码的CreCDEFGHI七个酶蛋白的催化功能和酶学特性进行了解析,并成功实现了整条降解途径的体外重建.首先,对甲酚被双亚基磷酸化酶CreHI转化为4-甲苯基磷酸;然后,4-甲苯基磷酸中的甲基被一种多功能细胞色素P450氧化系统CreJEF连续氧化,生成磷酸化的醇、醛、酸中间产物;最终,上述磷酸化中间产物被磷酸水解酶CreD水解,分别生成对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛和对羟基苯甲酸;对羟基苯甲酸可进入微生物中心代谢而被完全降解利用.此外,该降解途径中还含有一个醇脱氢酶CreG和一个醛脱氢酶CreC,这两种酶的存在可进一步加强对甲酚的降解效率.

摘要： 本发明涉及通式I的开环二酮(Secodion)衍生物的对映体选择性酶促还原方法

摘要： 本发明涉及通式I的开环二酮(Secodion)衍生物的对映体选择性酶促还原方法，其中环结构不包括杂原子、包括一个杂原子或包括数个杂原子，R

摘要： 在此披露的是一种对于以下而言的新发现的问题和解决方案，利用木糖异构酶转化木糖为木酮糖用于经由木酮糖激酶进入戊糖磷酸途径，来将酿酒酵母进行工程化来发酵木糖制造乙醇。当生长在包含有木糖的一种培养基上时，木糖醇趋向于在细胞中积累，尽管在酿酒酵母中缺失木糖还原酶活性。木糖醇抑制木糖异构酶活性。一种描述的解决方案是同时表达一种外源木糖醇脱氢酶连同该外源木糖异构酶同时还任选地在缺失一种木糖还原酶表达情况下过表达木糖激酶。另一种解决方案是来自脆弱拟杆菌的一种木糖异构酶，与其他木糖异构酶（例如大肠杆菌木糖异构酶）相比更不受木糖醇抑制。该脆弱拟杆菌木糖异构酶的表达可以单独使用，或与木糖醇脱氢酶的表达以及任选地与木酮糖激酶的过表达组合使用以改进来自木糖的乙醇生产。

摘要： 本发明提供了一种乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶共交联酶聚集体的制备方法，具体的本发明通过高密度发酵破壁离心后的上清作为粗酶液，将粗酶液中的乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶经戊二醛交联制备共交联酶聚集体，而且通过添加吐温80将共交联酶聚集体的酶活回收率提高到82％。

摘要： 本发明涉及一种利用酶比色法技术的山梨醇脱氢酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定山梨醇脱氢酶活性浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、辅酶、山梨醇及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主波长340nm处吸光度上升的速度，从而测算出山梨醇脱氢酶的活性浓度大小。采用本发明完全可以通过紫外/可见光分析仪器得出所需的测定结果。

摘要： 本发明披露的是一种对于以下而言的新发现的问题和解决方案，利用木糖异构酶转化木糖为木酮糖用于经由木酮糖激酶进入戊糖磷酸途径，来将酿酒酵母进行工程化来发酵木糖制造乙醇。当生长在包含有木糖的一种培养基上时，木糖醇趋向于在细胞中积累，尽管在酿酒酵母中缺失木糖还原酶活性。木糖醇抑制木糖异构酶活性。一种描述的解决方案是同时表达一种外源木糖醇脱氢酶连同该外源木糖异构酶同时还任选地在缺失一种木糖还原酶表达情况下过表达木糖激酶。另一种解决方案是来自脆弱拟杆菌的一种木糖异构酶，与其他木糖异构酶（例如大肠杆菌木糖异构酶）相比更不受木糖醇抑制。该脆弱拟杆菌木糖异构酶的表达可以单独使用，或与木糖醇脱氢酶的表达以及任选地与木酮糖激酶的过表达组合使用以改进来自木糖的乙醇生产。

摘要： 本发明涉及二氧化硅结合肽介导醇脱氢酶和胺脱氢酶共固定化级联反应制备手性胺的方法；采用重叠延伸PCR技术将二氧化硅结合肽的基因分别插入到介导醇脱氢酶和胺脱氢酶的基因序列的N末端并构建基因工程菌株；利用镍离子金属螯合亲和色谱柱及含高浓度的咪唑缓冲液纯化分离重组蛋白；利用二氧化硅纳米粒子作为固定化酶的载体，将重组蛋白共锚定在SNPs表面得到固定化酶CotB1p‑ADH&CotB1p‑AmDH@SNPs；将获得的固定化酶置于含有NAD+和外消旋醇的NH4Cl缓冲液中反应进行手性胺的制备。制得的双酶共固定化催化剂表现出较高的酶负载量和提高的催化活性与稳定性，在工业应用生产手性胺方面具有较大的潜力。

摘要： 本发明公开了一种醇脱氢酶及其基因，以及含有该基因的重组表达载体和重组表达转化体，其重组酶以及该酶作为催化剂在不对称还原合成手性双芳基仲醇中的应用，属于生物工程技术领域。本发明的醇脱氢酶来源于克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.CCTCCM2011385)，不仅具备还原羰基的功能，而且具备氧化羟基的功能。应用所述醇脱氢酶作为生物催化剂不对称还原双芳基酮为手性双芳基醇时，不需要额外添加如葡萄糖脱氢酶等用于辅因子循环的酶，催化效率高，反应条件温和，易于产物回收，成本低，因此在抗组胺药物的生产中具有很好的应用开发前景。

摘要： 本发明提供了一种乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶共交联酶聚集体的制备方法，具体的本发明通过高密度发酵破壁离心后的上清作为粗酶液，将粗酶液中的乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶经戊二醛交联制备共交联酶聚集体，而且通过添加吐温80将共交联酶聚集体的酶活回收率提高到82％。

摘要： 本发明属于生物技术领域，特别涉及两个具有激活乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性的多肽及其应用。这两个同时具有激活乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性的多肽为：多肽ARMNV、多肽FDPSL；其能用于制备醒酒产品。