醛脱氢酶

摘要： 目的:提高威克汉姆酵母醛脱氢酶在冷藏和胃肠道环境中的稳定性,开发消减胃肠道内活性醛的产品。方法:从6株异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)中选取醛脱氢酶(ALDH)活性最高的菌株提取ALDH,采用海藻酸钠—氯化钙法对ALDH进行包埋,研究了包埋对ALDH在冷藏及模拟胃肠道环境中的稳定性。结果:W.anomalus菌株J3、J7、J8、J9、J12、J18产生的ALDH比活力在86.77~482.14 U/mg,菌株J9的ALDH的比活力最高,为482.14 U/mg;最优包埋条件为海藻酸钠3.0%,氯化钙3.0%,包埋酶的活力为480.71 U/g;游离酶在4°C下放置5 d酶活下降至50%以下,包埋酶酶活维持在90%以上;在体外模拟胃肠道环境下,游离酶在模拟胃液中10 min内完全失去活性,而包埋酶在胃液环境中3 h酶活保留率为56.39%,肠液中1 h酶活保留率为56.35%。结论:海藻酸钠—氯化钙包埋法可显著提高异常威克汉姆酵母ALDH的稳定性。

摘要： 饮酒会加速肿瘤恶化近期,中山大学符立梧团队在Advanced Science发表了题为"Aldehyde Dehydrogenase2 Mediates Alcohol-Induced Colorectal Cancer Immune Escape through Stabilizing PD-L1Expression"的论文,该研究发现酒精可在体内、外诱导结直肠癌(CRC)细胞的程序性细胞死亡受体1的配体1(PD-L1)表达。该研究表明,暴露于酒精会诱导醛脱氢酶2(ALDH2)的表达,这是一种参与酒精代谢的关键酶,并且在鼠CRC模型和患者中淋巴细胞浸润水平较低。CRC患者的肿瘤组织中ALDH2和PD-L1蛋白表达呈正相关。从机制上讲,ALDH2通过与PD-L1的细胞内部分发生物理相互作用并抑制由E3泛素连接酶Speckle型POZ蛋白介导的蛋白酶体依赖性降解来稳定PD-L1蛋白的表达。重要的是,抑制ALDH2会降低CRC细胞中的PD-L1蛋白并促进肿瘤浸润性T细胞的浸润。这些发现突显了ALDH2在促进酒精介导的肿瘤逃脱免疫监测和促进肿瘤进展方面所起的关键作用。

摘要： 松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是松萎蔫病的病原,可引起数十种松属树种的毁灭性破坏。通过RT-PCR 成功克隆了松材线虫体内一种醛脱氢酶基因aldh,aldh的长度为1 353 bp,编码451 个氨基酸残基,前期研究表明,杀线剂甲吡唑处理能使aldh表达水平显著上调。序列比对表明,与大多数其他醛脱氢酶中依靠半胱氨酸(Cys)残基发挥催化功能不同,aldh 编码的蛋白质保守的位置是亮氨酸(Leu)残基,但其C-端紧邻Leu残基的是组氨酸残基(His),而不是常见的Leu残基。构建了表达载体pET-15b-aldh并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导aldh在工程菌中实现了高表达,重组醛脱氢酶通过Ni-NTA亲和层析纯化后进行表征。以甲醛为底物的醛脱氢酶Km为27.87 mmol/L,最适pH值为7.5,最适温度为25°C,Fe^(3+)和Ni^(2+)可提高酶活性,Ca^(2+)、Mn^(2+)、Na^(+)和K^(+)可降低酶活性。重组醛脱氢酶对5种醛类化合物显示出不同的催化活性,其中香草醛是其最佳底物。该研究为深入了解醛脱氢酶在松材线虫致病过程中的作用打下了基础,也为新型工业用醛脱氢酶的研究提供了参考。

摘要： 目的 观察双硫仑(DSF)对人脂肪肉瘤细胞SW872的抑制作用,并探讨其相关分子机制.方法 体外培养SW872细胞,设立正常细胞对照组及DSF 1,2.5,5和10μmol·L-1组,采用CCK-8法检测药物处理24 h后对细胞增殖的抑制作用;光镜下观察DSF处理后SW872细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;克隆形成实验检测DSF对SW872细胞克隆形成能力的影响;Western印迹法检测A20的表达;CCK-8法检测铁离子螯合剂Fer-1及炎症小体NLRP3抑制剂MCC950能否逆转DSF对SW872细胞的抑制作用;RT-PCR法检测DSF对SW872细胞中A20和醛脱氢酶(ALDH1)的mRNA水平.结果 DSF对SW872细胞增殖有显著抑制作用(P<0.01);DSF处理后使SW872细胞发生皱缩变圆且细胞间隙增大;DSF作用于SW872细胞24 h后,与正常细胞对照组相比,DSF 1μmol·L-1组细胞早期凋亡率明显增加〔(32.6±1.82)％vs(3.50±0.64)％,P<0.05〕;DSF 0.1μmol·L-1组明显抑制SW872细胞的克隆形成〔(16.7±7.02)％vs(129±5.29)％,P<0.05〕;DSF处理能够明显提高SW872细胞中炎症调节分子A20的表达;铁离子鳌合剂Fer-1不能逆转DSF导致的细胞生长抑制,而炎症小体抑制剂MCC950可以部分逆转DSF对SW872细胞增殖的抑制作用.结论 DSF能抑制SW872细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过细胞炎症小体介导,细胞炎症调节分子A20参与DSF对SW872细胞的抑制作用.

摘要： 西红花苷是一种由藏花酸和葡萄糖或龙胆二糖形成的类胡萝卜素类化合物,具有抗动脉粥样硬化、抗高血压、降血脂、抗氧化、抗抑郁、抗癌、抗炎等药理活性.然而,西红花苷类成分在植物界分布较窄,含量较低,且提取工艺复杂,导致其供不应求.随着基因组和转录组测序技术的发展,参与西红花苷合成途径的相关酶基因逐渐被克隆和鉴定.对西红花苷生物合成路径以及该通路相关酶基因的研究现状进行综述,以期为利用代谢工程生产或提高西红花苷类物质提供理论基础,从而扩大西红花苷的开发利用.

摘要： 背景:miR-10b能够调控乳腺癌干细胞的相关特性,乙醛脱氢酶1是最重要的乳腺癌干细胞标记物之一,二者在乳腺癌细胞中的相互作用尚需进一步研究。目的:探讨miR-10b对乳腺癌MCF-7细胞中乳腺癌干细胞标记物乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白表达的影响。方法:常规培养乳腺癌MCF-7细胞株,分别将miR-10b模拟物或其阴性对照转染进入乳腺癌MCF-7细胞;转染48 h,通过实时荧光定量PCR实验和Western blot实验检测乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白的表达。结果与结论:①将miR-10b模拟物转染进入MCF-7细胞之后,miR-10b在MCF-7细胞株中的表达显著高于对照组(P=0.003 47);②miR-10b过表达之后显著上调了MCF-7细胞株中乙醛脱氢酶1 mRNA和蛋白的表达(P=0.009 54和P=0.003 11);③结果表明,上调miR-10b表达能够诱导乙醛脱氢酶1阳性乳腺癌干细胞的产生,从而为miR-10b调控乳腺癌细胞侵袭、转移提供新的研究依据。

摘要： 目的 观察葛黄颗粒对酒精性肝病大鼠醇脱氢酶(ADH)、醛脱氢酶(ALDH)及细胞色素P4502E1(CYP4502E1)活性的影响.方法 白酒灌胃加普通饲料饮食复制酒精性肝病大鼠,复制成功后,白酒灌胃继续,除模型组外,葛黄颗粒高、中、低剂量干预组同时分别给予不同浓度的葛黄颗粒灌胃,正常组一直采用相同剂量蒸馏水灌胃,13周后处死大鼠,行肝组织HE染色、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、ADH、ALDH含量检测,Western blot检测肝CYP4502E1蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组的肝脏指数、肝功能指标、ADH及CYP4502E1均升高(P<0.01),而ALDH却降低(P<0.01);与模型组比较,不同剂量(高、中、低)葛黄颗粒干预组均可逆转以上检测指标,且存在一定的量效关系,即高、中剂量组逆转效果较好(P<0.01).结论 一定剂量葛黄颗粒可通过调节ADH等乙醇代谢酶活性延缓或逆转酒精性肝损伤的发生.

摘要： 目的 研究经流式分选的ALDHhi细胞、ALDHlo细胞及未分选Tca8113细胞对4种常用化疗药物的体外敏感性差异,为肿瘤干细胞耐药性研究提供证据.方法 应用CCK-8法检测分选后的ALDHhi细胞、ALDHlo细胞及未分选Tca8113三种细胞对四种常用化疗药物顺铂、长春新碱、紫杉醇、5-FU的敏感性差异.结果 通过方差分析及LSD两两比较可知3种细胞对4种药物的耐药性由高到低依次为ALDHhi细胞、未分选Tca8113原代细胞、ALDHlo细胞(P﹤0.05),未分选Tca8113细胞对化疗药物的敏感性由高到低依次为长春新碱、紫杉醇、顺铂、5-FU,ALDHhi细胞(P=0.343)、ALDHlo细胞(P=0.181)对长春新碱、紫杉醇的敏感性对比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 ALDHhi细胞具有较强的耐药性,复发舌癌对于化疗的不敏感性可能与其含量有关.

摘要： In this experiment,Cupriavidus necator GabD4 and Azospirillum brasilense KGSADH aldehyde dehydrogenase genes were cloned by polymerase chain reaction (PCR),and the resulting PCR products were ligated to plasmid pUC19Kan whose ampicillin resistance had been modified to kanamycin resistance.Then,the recombinant plasmids were transformed into Klebsiella pneumoniae DSM2026,and designated KpKan/KGSADH and KpKan/GabD4.Through shake-flask fermentation,their maximum 3-hydroxy propionic acid (3-HP) yield reached 3.66 and 2.56 g/L respectively,which was 352％ and 216％ higher than that of the control strain.In addition,analysis of other products showed that 1,3-propylene glycol (1,3-PDO) contents in both recombinant strains were lower whereas 2,3-butylene glycol(2,3-BD) and acetic acid contents were higher than those of the control strain.This is the first report regarding the introduction of C.necator GabD4 aldehyde dehydrogenase into K.pneumoniae and comparing the 3-HP yield between KpKan/KGSADH and KpKan/GabD4,the obtained results are great interest for further improvement of 3-HP production.%PCR扩增Cupriavidus necator GabD4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的pUC19质粒(pUC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/GabD4.经摇瓶发酵,KpKan/KGSADH和KpKan/ GabD4的最高3-羟基丙酸(3-HP)产量分别为3.66与2.56 g/L,与未导入醛脱氢酶的K.pneumoniae对照菌相比,分别提高了352％与216％.对其他产物的研究表明,2株重组菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)的产量低于对照菌,而2,3-丁二醇(2,3-BD)和乙酸产量高于对照菌.该研究首次将C.necator GabD4醛脱氢酶基因导入K.pneumoniae,并对比了KpKan/KGSADH与Kp-Kan/ GabD4的3-HP产量,实验中确定的性能优良的发酵菌株为继续提高3-HP产量提供了帮助.

摘要： 扩增了E. coli JM109中的醛脱氢酶基因(aldA),构建了诱导型表达载体pUC18-aldA-Tet,导入Klebsiella pneumoniaeATCC25955 后获得了表达含醛脱氢酶基因的重组菌Klebsiella pneumoniae/pUC18-aldA-Tet.通过对该酶表达条件考察,得到了该酶表达的最佳条件:重组菌在1.0 mmol/L IPTG 诱导6 h,pH为7.0,温度为40°C条件下,该酶的催化活力较显著;对几种不同作用底物催化活力比较发现:该酶作用的最佳底物为乙酰-CoA,依赖于辅酶NADH.将重组菌在摇瓶中以30 g/l甘油为底物进行微氧发酵培养,经IPTG 诱导,3-羟基丙酸的浓度可达到0.8 g/L.

摘要： 途径工程(Pathway engineering)经常涉及多酶催化,需将多个酶基因克隆至同一载体进行共表达.目前大多数载体构建仍延用传统的"酶切-连接"策略,操作步骤多,需要多种酶和载体,克隆多基因时耗时长,克隆大片段时又难于连接.PCA 策略可提高载体构建效率,该方法依赖DNA 聚合酶而不是连接酶.设计的20 bp 引物跨越目的基因两端及其相邻的载体骨架,通过重叠PCR 可将目的基因和载体骨架连接成环状分子.基于PCA 策略,本研究成功地将醛脱氢酶基因整合至表达载体pET28a,不仅为生物合成C3 平台化合物3-羟基丙酸奠定了基础,而且探索了一种新的载体构建方法.

摘要： 利用小麦芽粉中的醛脱氢酶(ALDH)对大豆进行脱腥处理,使大豆中的腥味物质转变为酸,从而有效消除大豆中的豆腥味.通过测定总醛含量(以己醛计),结合感官评定,研究了作用温度、作用时间、ALDH添加量对豆腥味的影响.结果表明,小麦芽最佳作用温度为45°C;最佳作用时间为2.5 h;最佳添加量为大豆干质量的2%,对豆腥味及适口性影响的因素大小依次为:作用温度＞作用时间＞添加量.

摘要： 本文主要采用溶胶-凝胶法对甲醛脱氢酶进行固定化,并研究了游离和固定化醛脱氢酶酶促反应的动力学.游离和固定化醛脱氢酶酶促反应都符合Daziel双底物酶促反应动力学模型,固定化后的酶活为同条件下游离酶活性的50﹪左右.固定化酶能重复使用5次以上.

摘要： 谷氨酸棒状杆菌(简称谷棒杆菌,Corynebacterium glutamicum)是生产氨基酸、维生素等多种化学品的重要工业微生物菌种.近期研究发现谷棒杆菌能够降解以对甲酚(p-cresol)为代表的多种芳香族化合物,展现出其在治理芳烃环境污染方面的潜力.基于前期从谷棒杆菌ATCC13032中鉴定的对甲酚生物降解相关基因簇“cre”,通过体外实验对该基因簇编码的CreCDEFGHI七个酶蛋白的催化功能和酶学特性进行了解析,并成功实现了整条降解途径的体外重建.首先,对甲酚被双亚基磷酸化酶CreHI转化为4-甲苯基磷酸;然后,4-甲苯基磷酸中的甲基被一种多功能细胞色素P450氧化系统CreJEF连续氧化,生成磷酸化的醇、醛、酸中间产物;最终,上述磷酸化中间产物被磷酸水解酶CreD水解,分别生成对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛和对羟基苯甲酸;对羟基苯甲酸可进入微生物中心代谢而被完全降解利用.此外,该降解途径中还含有一个醇脱氢酶CreG和一个醛脱氢酶CreC,这两种酶的存在可进一步加强对甲酚的降解效率.

摘要： 本发明公开了一种醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的微波辅助共固定化方法，所述方法为：将载体交联剂混合活化，离心，取沉淀用PBS溶液洗涤，离心，沉淀重新分散于PBS溶液中；向分散液中加入醛酮还原酶及葡萄糖脱氢酶，混合液在0～10°C，20～45W微波条件下照射1～5min，离心，取沉淀用PBS溶液洗涤，得到共固定化酶；与游离酶相比，本发明制备的共固定化酶在催化活力、热稳定性、pH稳定性方面都有所提高；葡萄糖脱氢酶作为其辅酶再生系统可提供反应所需NAD(P)H，降低成本，有利于工业化生产。

摘要： 本发明公开了一种醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的固定化方法，所述方法为：将醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶混合后加入海藻酸钠水溶液中，搅拌混匀后，滴加入CaCl2水溶液中，4°C冰箱内静置，蒸馏水洗涤，真空抽滤，获得固定化颗粒；通过本发明制备的共固定化酶与游离醛酮还原酶相比，催化活性提高了1.32倍，热稳定性、pH稳定性等方面的性质也有所改善，同时，共固定化酶的重复使用降低了成本。

摘要： 本公开涉及一种用于甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒，包括：包被有甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶单克隆抗体的化学发光酶标板、甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶标准品、碱性磷酸酯酶标记的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶单克隆抗体、样品稀释液、抗体稀释液、化学发光液和洗涤液。本公开采用化学发光酶联免疫试剂盒对甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶进行检测，操作简单、样品用量少、用时短、灵敏度高、准确性和重复性好。与传统的ELISA法比较，操作时间大幅度减少。

摘要： 本发明公开了一种共表达烯醛还原酶和葡萄糖脱氢酶的重组基因工程菌及其催化异戊烯醛合成异戊烯醇的应用，所述工程菌是将烯醛还原酶基因和D‑葡萄糖脱氢酶基因共同导入宿主菌获得的。本发明方法具有高区域选择性和高活力的优点，500mM底物异戊烯醛在3.5h内完全转化为产物异戊烯醇，反应过程中没有检测到副产物饱和醇，表明该方法高效专一地催化异戊烯醛的C＝O加氢从而得到相应的异戊烯醇。同时，所述的重组细胞诱导产生D‑葡萄糖脱氢酶，以葡萄糖为辅底物，葡萄糖脱氢酶可以不断将NADP+转化为NADPH，反应过程无需额外加入辅酶，从而极大地降低生产成本，更加适用于大规模工业化生产。

摘要： 本发明公开了一种醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的微波辅助共固定化方法，所述方法为：将载体交联剂混合活化，离心，取沉淀用PBS溶液洗涤，离心，沉淀重新分散于PBS溶液中；向分散液中加入醛酮还原酶及葡萄糖脱氢酶，混合液在0～10°C，20～45W微波条件下照射1～5min，离心，取沉淀用PBS溶液洗涤，得到共固定化酶；与游离酶相比，本发明制备的共固定化酶在催化活力、热稳定性、pH稳定性方面都有所提高；葡萄糖脱氢酶作为其辅酶再生系统可提供反应所需NAD(P)H，降低成本，有利于工业化生产。

摘要： 本发明公开了一种醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的固定化方法，所述方法为：将醛酮还原酶和葡萄糖脱氢酶混合后加入海藻酸钠水溶液中，搅拌混匀后，滴加入CaCl2水溶液中，4°C冰箱内静置，蒸馏水洗涤，真空抽滤，获得固定化颗粒；通过本发明制备的共固定化酶与游离醛酮还原酶相比，催化活性提高了1.32倍，热稳定性、pH稳定性等方面的性质也有所改善，同时，共固定化酶的重复使用降低了成本。

摘要： 本发明是关于治疗精神病如抑郁症的方法和包括NMDA受体拮抗剂和抗抑郁症药物的组合物。

摘要： 业已发现与解脂耶氏酵母甘油醛－3－磷酸脱氢酶(gpd)和磷酸甘油酸变位酶(gpm)基因相连的启动子区对含油酵母内的异源基因表达尤其有效。本发明所述启动子区已被证实可驱动参与生成ω－3和ω－6脂肪酸的基因的高水平表达。

摘要： 本发明涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌的正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醛醛脱氢酶及其晶体结构。本发明利用分子克隆方法将目的基因克隆到大肠杆菌E.coli中进行异源表达。通过蛋白质纯化方法获得醛脱氢酶的纯品。利用悬滴结晶法得到适宜衍射的醛脱氢酶的结晶。利用X射线衍射方法对醛脱氢酶的晶体结构进行解析。结果表明，该醛脱氢酶中含有一个特征性的ALDH折叠，由三个结构域构成。对酶活性部位的保守残基进行定点突变，通过该酶的野生型及其突变体的酶活性实验证明保守残基对酶活性的影响。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醛脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。

摘要： 本发明涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌的正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醛醛脱氢酶及其晶体结构。本发明利用分子克隆方法将目的基因克隆到大肠杆菌E.coli中进行异源表达。通过蛋白质纯化方法获得醛脱氢酶的纯品。利用悬滴结晶法得到适宜衍射的醛脱氢酶的结晶。利用X射线衍射方法对醛脱氢酶的晶体结构进行解析。结果表明，该醛脱氢酶中含有一个特征性的ALDH折叠，由三个结构域构成。对酶活性部位的保守残基进行定点突变，通过该酶的野生型及其突变体的酶活性实验证明保守残基对酶活性的影响。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醛脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。