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布鲁氏菌野毒株A544和疫苗株104M差异蛋白的表达及抗体制备

         

摘要

选取布鲁氏菌差异蛋白部分基因序列,将其克隆到表达载体pGEX-6p-1中;经PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定,得到重组质粒pGEX-6p-1-bru;将重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,用1 mmol/L异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)对转化菌进行诱导表达,并用表达蛋白制备多克隆抗体.结果:差异蛋白在体外获得了高效表达,表达融合蛋白分子量约为35 kD;诱导5 h后表达量最高,占菌体总蛋白的30%左右;表达蛋白能与多克隆抗体发生免疫印迹反应,证明所表达的蛋白具有良好的免疫原性.该研究结果为免疫学检测方法的建立奠定了基础.

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