差异蛋白

摘要： 背景:丹酚酸A对缺血性脑卒中后缺血侧海马区蛋白表达的影响及其作用机制尚未明确.目的:观察丹酚酸A对缺血性脑卒中大鼠海马区蛋白差异表达的影响,探讨其可能的神经保护机制.方法:采用改良Longa方法制备缺血性脑卒中大鼠模型,造模后随机分为生理盐水组与丹酚酸A组(n=6).丹酚酸A组于线栓拔出后尾静脉注射2 mg/kg丹酚酸A;生理盐水组注射等体积的生理盐水.采用改良神经功能缺损评分标准评价大鼠神经功能;T2加权成像检测脑梗死体积;旷场实验及Morris水迷宫测试观察各组大鼠的自主行为、学习记忆能力;串联质谱标签定量蛋白组学技术分析缺血性脑卒中模型大鼠缺血侧海马区蛋白的差异表达.结果 与结论:①与生理盐水组相比,丹酚酸A组大鼠改良神经功能缺损评分显著降低;②T2加权成像显示,丹酚酸A组较生理盐水组脑梗死体积明显减少;③旷场实验结果发现,丹酚酸A组大鼠自主活动及自由探索行为表现更佳;④Morris水迷宫测试结果表明,丹酚酸A组大鼠在定向航行实验中逃避潜伏期明显缩短、穿越平台次数相较于生理盐水组显著增加;⑤缺血侧海马区差异蛋白质分析结果发现,丹酚酸A组与生理盐水组之间筛选出50个上调及3个下调差异蛋白;基因本体论分析表明它们主要参与binding,catalytic activity等分子功能;京都基因和基因组百科全书信号通路分析显示,它们主要涉及Complement and coagulation cascades,Staphylococus aureus infection等信号通路;⑥结果显示,丹酚酸A可能通过调控缺血性脑卒中大鼠缺血侧海马区差异蛋白、补体及凝血级联信号通路,对缺血性脑卒中大鼠发挥神经保护作用.

摘要： 背景:课题组前期研究发现鹿角胶小分子肽富含促进骨生长的肽链,对骨髓间充质干细胞具有良好的促增殖、促成骨化作用.目前对鹿角胶防治股骨头坏死的研究仅停留在物质基础及药效学研究方面,其作用机制及作用靶点尚未明确.目的:基于蛋白质组学初步探讨鹿角胶治疗股骨头坏死的作用机制.方法:SPF级雌性Wistar大鼠36只,随机分为空白组、模型组、鹿角胶组,后2组大鼠灌胃维甲酸70 mg/kg,每日1次,连续灌胃8周,建立股骨头坏死大鼠模型;空白组大鼠不做处理.造模8周后鹿角胶组大鼠给予鹿角胶0.35 g/kg,模型组、空白组予同体积0.9％氯化钠溶液,每天灌胃1次,连续给药8周.通过骨组织病理切片检验造模是否成功及鹿角胶对股骨头的修复效果.通过非标(Label-free)蛋白质组定量技术研究各组之间的差异蛋白情况,根据GO和KEGG数据库分析对差异蛋白的生物功能及参与的信号通路进行富集;采用蛋白质互作STRING Database构建靶点蛋白相互作用图.实验方案经山东省中医药研究院动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①骨组织病理切片结果显示,鹿角胶可有效修复股骨头坏死;②蛋白质组学共鉴定蛋白1457种,空白组与模型组、模型组与鹿角胶组共同差异蛋白共有353种,其中,在模型组升高或降低的差异蛋白,经过鹿角胶干预后明显回调的蛋白有97种;③鹿角胶治疗股骨头坏死的作用机制涉及到血液循环、能量代谢、炎症反应及免疫过程,利用差异蛋白质组学寻找的蛋白质二硫键异构酶(P4HB)、钙黏蛋白2(CDH2)、膜联蛋白A2(ANXA2)、枯草杆菌前蛋白转换酶/可信9型(PCSK9)、乳脂球-表皮生长因子8(MFGE8)、骨形态发生蛋白等可能是鹿角胶的重要靶点,鹿角胶可能通过调控转化生长因子β、糖酵解/糖异生、PI3K-Akt信号通路等治疗股骨头坏死.

摘要： 【目的】从蛋白水平阐明牦牛抗寒性能机理,并进一步从营养学角度提高其代谢性能,为牦牛有效抵御外界恶劣气候条件提供科学依据。【方法】应用TMT蛋白组学技术对寒冷季节(1月)和温暖季节(8月)的牦牛抗冻蛋白进行挖掘,并对鉴定到的牦牛抗冻蛋白进行亚细胞定位、结构域、GO功能富集、KEGG信号通路注释、蛋白相互作用等生物信息学分析。【结果】从牦牛耳组织中共鉴定获得21856个肽段(Peptide),其中特有肽段(Unique peptide)序列为18452个,定量获得4519个蛋白,最终筛选出144个差异蛋白,其中上调蛋白89个、下调蛋白55个。144个牦牛抗冻差异蛋白亚细胞定位到7个条目上,分别是细胞核蛋白56个、细胞质蛋白51个、质膜蛋白24个、细胞外蛋白23个、线粒体蛋白18个、细胞骨架蛋白1个和溶酶体蛋白1个;共鉴定到194个结构域。GO功能富集分析结果显示,生物过程主要富集到细胞过程蛋白79个、代谢过程蛋白70个和生物调控蛋白42个等,分子功能主要富集到结合功能蛋白75个和催化活性蛋白64个等,细胞组分主要富集到细胞部分蛋白89个和细胞蛋白89个等。144个牦牛抗冻差异蛋白在KEGG数据库中注释到205条KEGG信号通路,主要涉及核糖体、氮代谢、胞质DNA感受、动物体内生热作用、氧化磷酸化、白细胞介素-17及钙离子信号等通路。牦牛抗冻差异蛋白相互作用网络分析发现L8IHE5的关联度最高,且冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)和HSP70结合蛋白在蛋白相互作用网络中具有更多的相互作用关系。【结论】基于TMT蛋白组学对牦牛抗冻差异蛋白进行挖掘,结果鉴定获得144个抗冻差异蛋白(上调蛋白89个,下调蛋白55个),其中CIRP和HSP70在冷应激条件下呈上调趋势,能促使牦牛肌体适应低温环境,可作为牦牛抗冻性育种的候选分子标记。

摘要： 为了探明不同感染状态结核病牛血清蛋白质水平的差异,揭示结核病牛在不同感染状态下的生理状态。本研究通过皮内变态反应、IFN-γ释放试验从临床筛选结核病阳性牛(TB)和阴性牛(NC),根据牛鼻拭子巢式PCR检测结果将临床阳性牛(TB)分为PCR阳性结核病牛(TBP)和PCR阴性结核病牛(TBN),每组20头,采集血清。应用同位素标记绝对定量(iTRAQ)/质谱(MS)联用技术,筛选不同感染状态结核病牛血清中的差异蛋白,结合平行反应监测技术(PRM)对6个差异蛋白进行鉴定。结果表明:TB/NC组共筛选到223个差异蛋白(差异倍数≥1.5或者≤0.67倍,P≤0.05),其中上调蛋白112个,下调蛋白111个;TBP/TBN组共筛选到74个差异蛋白,其中上调蛋白46个,下调蛋白28个;PRM成功鉴定到了6个差异蛋白且变化趋势与iTRAQ结果一致;同时,生物信息学分析表明,牛感染结核分枝杆菌后补体系统和凝血系统发生了显著改变。本研究证实了不同感染状态结核病牛在血清蛋白质组成上的差异巨大,表明了牛结核病不同感染状态下不同的生理状态,为牛结核病的不同感染状态的区分提供了理论支持,同时为牛结核病的防控奠定了一定基础。

摘要： 目的筛选酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)患者血浆外泌体中的差异蛋白,分析其功能及生物学过程,为ALD患者的治疗和诊断提供参考依据。方法选取2021年5月至2021年10月在首都医科大学附属北京佑安医院住院并确诊为ALD的患者和健康体检者各3例,超速离心分离提纯外泌体,提取蛋白,串联质谱标签(tandem mass tag, TMT)标记后,采用定量蛋白组学技术对两者血浆中的外泌体蛋白进行鉴定和定量分析,筛选出差异蛋白,并用生物信息学分析差异蛋白的功能及其参与的生物学过程。结果共鉴定到可定量蛋白质387种,以倍数上调>1.2倍或下调>1.2倍且P<0.05为标准筛选出差异蛋白27种,与健康对照组相比,ALD组上调蛋白15种、下调蛋白12种,生物信息学分析结果显示,这些蛋白主要参与了脂质的代谢、免疫反应和细胞的死亡等生物学过程,并与炎症反应、细胞的损伤和补体级联反应等信号通路密切相关。结论 TMT标记定量蛋白质组学技术筛选出的差异蛋白可能作为ALD早期诊断的血清学标志物及治疗靶点。

摘要： 为探索空间站内航天复合应激环境下模型大鼠大脑皮层形态及蛋白表达的变化,将20只大鼠随机分为对照组与航天复合应激模型组,通过尾吊、孤养、噪声、时序变化42 d建立模拟航天复合应激模型。造模成功后,将各组大鼠大脑皮层组织进行尼氏染色与抗体芯片筛选差异蛋白。结果表明:与对照组相比,模拟长期航天应激模型会造成大鼠大脑皮层神经元损伤,神经元数量显著减少(P<0.01);Mod组抗体芯片发生显著变化的蛋白有28个,其中上调的有21个,下调的有7个;KEGG通路富集分析变化较为显著的信号通路有MAPK、p53等与神经系统相关的信号通路。航天复合应激环境会导致大鼠大脑皮层脑组织形态发生改变,也会对皮层组织中相关蛋白产生影响。

摘要： 目的:采用蛋白组学技术研究牙龈炎,筛选实热“上火”血清差异表达蛋白,为实热“上火”机制引起的牙龈炎的进一步研究提供科学依据。方法:收集“实热”上火牙龈炎患者和健康对照者血清,采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ),并对血清蛋白质进行检测。结合生物信息学分析(GO、STRING)筛选并鉴定出实热“上火”者与对照者人群差异显著的蛋白质。结果:筛选出实热“上火”牙龈炎组与正常对照组相比有43个差异蛋白,其中上调的有27个,下调的有16个。C反应蛋白(CRP)、载脂蛋白家族(ApoC2,APOD,APOM)、血清淀粉样酶A(SAA)、凝血因子12等显著上调,而α-1抗胰蛋白酶(AAT)、热休克蛋白(HSPB1)、微管蛋白等显著下调。结论:实热“上火”牙龈炎组脂质代谢异常与氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的发生密切相关。通过研究分析凝血功能下降,易造成出血,筛选的差异蛋白可为实热“上火”牙龈炎的生物学基础研究提供理论依据。

摘要： 目的筛选非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血浆外泌体差异蛋白,分析其功能及其生物学过程,为NAFLD患者临床诊断提供参考依据。方法2020年7月~10月我院诊治的NAFLD患者3例和健康体检者3例,采用串联质谱标签(TMT)标记定量蛋白质组学技术对血浆外泌体蛋白进行鉴定和定量分析,筛选差异蛋白并进行功能富集分析,了解其参与的生物学过程。结果经外泌体蛋白质组学分析,共鉴定出蛋白质387种,以倍数上调>1.2倍或下调>1.2倍,且P<0.05为标准筛选出差异表达蛋白34种;健康人比,NAFLD患者上调蛋白25种,下调蛋白9种;生物信息学分析结果显示,这些蛋白主要参与了脂质的储存和代谢、免疫反应、纤维素形成等生物学过程,并与胰岛素抵抗、炎症反应、细胞损伤等信号通路密切相关。结论采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选NAFLD患者差异蛋白可能为其诊治提供指引。

摘要： 【目的】花椒果实(果皮)主要用作香料,同时也被用作传统中药。正常花椒以雌花为主,偶见雄花和两性花。近年来,位于贵州西南地区的顶坛花椒出现大量开雄花现象。雄花不是花椒结实的必需条件,已有研究认为该现象与生境退化有关。因此,研究顶坛花椒花芽发育过程中的蛋白质组学特征,对于从分子水平比较雌雄花芽发育差异,进而理解该物种对喀斯特生境的适应具有重要意义。【方法】采用TMT定量技术研究了顶坛花椒花序轴分化期花芽、雄花芽和雌花芽蛋白质组学特征。【结果】共检测到4 742个差异蛋白,与花序轴分化期花芽相比,雌花芽和雄花芽的上调差异蛋白主要参与的通路中,大部分相同。然而,核糖体通路仅显著参与雌花芽发育调控。与雌花芽相比,仅在雄花芽中出现的脂肪酸降解以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的降解通路可能有利于增强顶坛花椒对养分贫瘠的适应。挖掘到脂肪酰-CoA还原酶、含果胶裂解酶3结构域蛋白和α-半乳糖苷酶等9个差异蛋白与雄花发育特异相关,含核酸外切酶的结构域蛋白、含H15的结构域蛋白和腺嘌呤磷酸核糖转移酶等7个差异蛋白与雌花发育特异相关。【结论】顶坛花椒雌雄花芽发育过程具有显著不同的蛋白质组学调控机制,大量开雄花可节约资源,可能有利于植株对喀斯特生境的适应。

摘要： 【目的】二花脸猪是我国优良的地方猪种之一,冷冻精液可提高二花脸公猪的利用率,并加强其种质资源保护,但目前生产的二花脸猪冷冻精液基本不能满足生产需要。研究通过分析二花脸公猪不同耐冻性精子的蛋白质组学,以促进二花脸公猪精子耐冻性蛋白质标志物的筛选,从遗传水平分析精子耐冻性的影响因素,为提高精子耐冻性提供参考依据。【方法】通过冻存14头二花脸种公猪的精液,再对冷冻精液的冻后质量进行分析,根据精子冻后活率和冻后活力的高低筛选出耐冻性好和差(good freezability ejaculates,GFE和poor freezability ejaculates,PFE)的公猪各3头,利用串联质谱标记(tandem mass tag,TMT)技术对GFE组和PFE组的精子蛋白进行定量蛋白质组学分析,鉴定出GFE组和PFE组精子中的差异蛋白(differentially abundant proteins,DAPs)。利用GO富集分析对差异蛋白的功能进行注释,利用KEGG富集分析对差异蛋白的生物通路进行注释,通过STRING蛋白质互作数据库进行差异蛋白的互作网络分析并利用Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。【结果】研究发现GFE组和PFE组间共存在138个差异蛋白,PFE组与GFE组相比,有109个DAPs上调,29个DAPs下调。GO富集分析表明,共124个DAPs富集到47个GO term,主要富集到“细胞进程”“单有机体过程”“分子结合”“细胞”“细胞组分”等GO term。KEGG富集分析表明,DAPs主要富集到“肾素-血管紧张素系统”“补体和凝血级联”“血小板活化”等通路。从PPI网络可见53个节点和69条连接边线,有8个具有强互作关系的蛋白ALB、ACRBP、ACR、ZAN、ZPBP2、HSPA5、FGB、FGG,这些蛋白质的功能主要富集于“单受精”“有性生殖”“精细胞发育”等与动物生殖生理以及精子发生密切相关的功能。进一步分析表明,GFE组和PFE组间的DAPs主要包括氧化还原相关蛋白(GSTM3、PRDX5、ALB、PDIA1、PDIA4等)、精子发生与功能相关蛋白(HSPA5、MFGE8、DNAH1、DNAH7、CUL3等)、能量相关蛋白(HK1、PGM1等)以及凋亡与炎症相关蛋白(THBS1、ELSPBP1、CP等);PPI网络图分析可知3个DAPs(MME、ANPEP和PRCP)在肾素-血管紧张素系统(RAS)中相互作用。【结论】二花脸公猪不同耐冻性精子的蛋白质组分存在明显差异,可能对精子的冷冻性能产生影响,这些DAPs可作为精子耐冻性的候选蛋白标志物。

摘要： 目的：利用质谱技术对类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜中的免疫复合物进行全面的抗原谱分析.rn 方法：选取本院3例RA患者和3例骨关节炎(osteoar thritis,OA)患者的关节滑膜,通过蛋白提取、免疫沉淀、胶内酶解和液相色谱串联质谱系统,对滑膜免疫复合物进行抗原谱分析.用FOT值(Fraction of total)来评价蛋白的丰度,通过FOT值得比较筛选出上调蛋白和下调蛋白.用David和String软件对差异蛋白进行功能富集、相互作用网络和信号通路分析.rn 结果：在RA和OA患者的关节滑膜组织免疫复合物中分别鉴定到了511和526种蛋白.通过维恩图比较,发现相对于OA组,仅在RA组出现的蛋白有170种,RA和OA组的共有蛋白有341种,仅在OA组出现的蛋白有185种.通过FOT值的比较,发现RA组有45种蛋白发生上调,85种蛋白发生下调.rn 结论：热休克蛋白HSP90AA1、HSP70、人类白细胞抗原HLA-G、硫氧还蛋白、膜联蛋白A2和玻连蛋白可能通过不同的机制参与RA的发病过程,具有RA新的生物标志物的潜在应用价值.

摘要： 本研究以芘为高分子量PAHs典型代表物，探讨了短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)对水体中芘的降解性能，以及在降解过程中菌体的细胞特性变化，同时利用双向电泳技术研究了该菌在降解芘过程中的差异蛋白。

摘要： 为鉴定H9N2亚型禽流感病毒感染SPF鸡肺脏的差异表达蛋白，本研究利用同位素标记相对和绝对定量技术结合二维高效液相色谱—电喷雾串联质谱技术的蛋白质组学方法对H9N2亚型AIV感染的SPF鸡肺脏蛋白进行检测，鉴定出差异蛋白。本研究以SPF鸡肺脏为研究材料，利用同位素标记相对和绝对定量技术结合二维高效液相色谱—电喷雾串联质谱技术相结合方法研究H9N2亚型AIV感染鸡肺脏的蛋白质组水平差异。研究结果表明H9N2亚型AIV能引起宿主肺脏组织蛋白表达谱发生改变。推测钙粘蛋白、鸡防御素、钙调素、组成型热休克蛋白Hsc70、干扰素调节因子8、酪氨酸蛋白激酶等在流感病毒与宿主鸡相互作用中起重要作用。本研究结果为进一步研究宿主与病毒相互作用和抗病毒感染的机制奠定了基础。

摘要： 目的:rn 通过比较不同证候食管癌病人和健康对照血清差异蛋白表达谱,筛选不同证候食管癌血清差异蛋白并建立食管癌证候相关诊断模型,探讨其在食管癌中医辨证诊断中的意义,为食管癌证候分子诊断提供可参考的依据.rn 方法:rn 运用磁珠与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱相结合蛋白组学技术,对不同证候食管癌患者和健康对照血清做质谱检测分析,筛选出各证候组与健康对照组比较血清差异表达蛋白峰,并对筛选出的差异蛋白用MASCOT进行数据库检索和鉴定;以食管癌各证候组和健康对照组筛选出的各证候差异表达显著的蛋白峰建立证候相关蛋白组诊断模型,以新的样本对各证候筛选出的差异蛋白进行盲法验证,进一步确定筛选出的各证候血清差异蛋白.rn 结果:rn (1)食管癌各证候组与健康对照组血清差异蛋白质谱检测分析,分别得出瘀血内结11个、津亏热结组12个、气虚阳微组14个、痰气交阻组13个显著差异表达蛋白峰.rn (2)分别以各证候组和健康对照组筛选出的有显著差异表达的蛋白峰建立各证候食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,用新的样本进行盲法验证,结果显示,各证候组诊断模型特异性≥80％、准确性＞85％.rn (3)将上述各差异表达显著的蛋白质峰运用MASCOT进行蛋白数据库搜索,得出显著低表达的质荷比峰为2883的多肽为一种假定蛋白,名称为线粒体胞苷一磷酸激酶2 (CMPK2),相对分子质量为2672 Da.rn 结论:rn (1)通过磁珠和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术相结合的蛋白组学分析,得出了不同证候食管癌显著差异表达蛋白峰,并鉴定出质荷比峰为2883的蛋白为CMPK2蛋白,在B组和F组中显著高表达.rn (2)用新的样本并增加样本数量,对各证候组和健康对照组比较筛选出的有显著差异表达的血清多肽蛋白质谱峰建立各证候食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,进行盲法验证,有较好的特异性和较高的准确性,筛选出的食管癌各证候血清多肽差异蛋白在食管癌中医辨证诊断中具有重要意义,可以作为食管癌蛋白指纹图谱的辅助诊断.

摘要： 应用慢病毒干扰技术构建目的蛋白表达沉默的A549细胞株;应用MTT法及流式细胞术检测目的蛋白沉默后细胞的增殖及凋亡;应用RT-qPCR方法检测目的蛋白的mRNA表达水平;应用western blot方法检测目的蛋白的表达水平;应用ELISA法检测血液标本中Adipophilin的含量.通过以上实验探讨目的蛋白在肺腺癌发生、发展中的作用.研究表明，差异蛋白Adipophilin可促进A549细胞的增殖，抑制其凋亡，提示Adipophilin可能是一种癌基因。差异蛋白Adipophilin对腺癌及小细胞肺癌具有一定的诊断价值，但早期诊断价值有限;对晚期及吸烟指数≧400年支的肺癌患者Adipophilin诊断价值更大。

摘要： 低温是影响烟草生长发育的主要环境胁迫之一,对烟叶生产有重要影响.为揭示烟草耐冷性的分子机制,采用蛋白组学iTRAQ技术对两个耐冷不同的烟草品种NC567和台烟8号进行了研究.共鉴定出4317个差异蛋白,并对四个比较组获得的差异蛋白进行了深入分析.GO分析显示大部分差异蛋白参与代谢和细胞加工过程.在低温条件下,有55个蛋白在NC567中下调表达,但在台烟8号中上调表达.台烟8号中42个蛋白在常温条件下较低水平表达,而低温处理时的表达水平要高于NC567.研究结果揭示了这两个烟草品种在冷胁迫响应上的差异.这些差异表达蛋白涉及蛋白质合成和降解、光合作用和呼吸作用以及活性氧(ROS)清除等,它们对细胞低温响应过程中内在环境的建构具有重要作用.本研究鉴定的低温胁迫相关蛋白和代谢途径对烟草耐低温改良具有指导意义.

摘要： 伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),属于疱疹病毒甲亚科水痘疱疹病毒属,猪是PRV唯一的储存宿主,其感染后主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎,哺乳仔猪高死亡率,及种猪不育,对养猪业危害极大.通过对PRV JS-2012感染及未感染的细胞样品iTRAQ分析，通过数据库(uniprot)检索，共分析出3062个蛋白，其中鉴定到2h差异蛋白99个，4h差异蛋白255个，7h差异蛋白121个。GO注释显示这些差异蛋白参与多种生物学过程，参与细胞进程的蛋白比重最大，其次是参与单有机体过程及代谢过程，其余是生物调控、细胞成分合成及免疫反应等。通过阻GGPA四WAY分析得到各时间点差异蛋白参与的细胞通路，包括核糖体生物合成，内吞作用以及MAPK，PI3K-AKT等重要信号通路。

摘要： 奶牛乳热分为临床型低血钙症,即奶牛乳热(Milk Fever),以及亚临床型低血钙症(Subclinical Hypocalcemia).乳热是以分娩或产后母牛血浆钙浓度降低,产后瘫痪甚至昏迷为主要临床特征的一种营养代谢性疾病.本研究通过应用荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis,2D-DIGE)技术和质谱分析技术分离和鉴定乳热奶牛、亚临床低血钙奶牛和健康奶牛之间的血浆差异表达蛋白,探究这些蛋白在乳热发生过程中所起的作用.结果显示:本试验获得了奶牛乳热和亚临床低血钙症血浆差异表达蛋白的2D-DIGE电泳图谱,运用质谱技术和生物信息学技术鉴定出13种奶牛乳热血浆差异表达蛋白,分别为AOCC、IgM、ALB、ACT、FG、C、FGA、FGB、FGG、A2M、FX、SERPIN和未知蛋白.通过网络生物信息学的Networks分析、GO分析和Pathway分析和搜索,结果提示A2M、FGA、FGB、C(C4A)、ALB、IgM、FX和SERPIN,共8种蛋白,探究了这些差异蛋白与疾病可能存在的关系,及证实这些蛋白在疾病发生中所起的作用,尚需进一步验证.本试验为阐明奶牛乳热发生机制和判定病情与防治效果提供了新的方向.

摘要： 目的:利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选晚期卵巢癌组织中卡铂耐药相关差异表达蛋白.rn 方法:收集Ⅲ期原发低分化卵巢浆液性腺癌标本并通过ATP-TCA药敏试验检测体外卡铂敏感性.取卡铂敏感和耐药标本各15例,组内等量混合后利用高效液相色谱柱去除高丰度蛋白,样本经iTRAQ试剂标记后利用二维色谱分离,经串联质谱鉴定.rn 结果:数据经搜索蛋白质数据库及数据处理后，共鉴定出iTRAQ标记定量信息有差异的蛋白755个。卡铂耐药组与卡铂敏感组相比，上调的蛋白有429个;下调的蛋白有326个。其中有Osteopontin(OPN),Clusterin(CLU)等18个蛋白与肿瘤恶性行为、化疗及预后情况显著相关。rn 结论:应用iTRAQ技术筛选出多种与晚期卵巢癌卡铂耐药相关的差异蛋白，该技术对于肿瘤组织蛋白质组学的研究有很好的应用前景。

摘要： 本研究以牛种布鲁氏菌2308强毒株和RB51疫苗株的差异蛋白(DsbG、CcrB、RirA、VceA)为研究对象，构建相应的基因突变株，比较相应的基因突变株和亲本株在自身生长状况，以及侵染滋养层细胞后，对宿主细胞的茹附、胞内生存及凋亡等方面产生的影响，初步探索这些差异蛋白的功能。本研究成功构建并获得稳定遗传的布鲁氏菌S2308△dsbG,△ccrB,△rarA和△vceA基因突变株，其自身生长趋势与亲本株类似，其中△rarA和△vceA基因突变株的生长速度快于亲本株;并且这些基因突变株和亲本株2308均不能引起自身的聚集现象;dsbG,ccrB ,rarA和vceA基因缺失后布鲁氏菌胞内生存相关表型发生了变化，OrarA突变株粘附侵染能力高于亲本株，△dsbG基因突变株粘附细胞的能力较亲本株低，而△ccrB和△vceA基因突变株在滋养层细胞的中复制能力低于亲本株。对细胞凋亡的研究发现，△rarA和△vceA突变株较亲本株可促进细胞的凋亡。本研究为揭示布鲁氏菌引发流产的分子机制提供了线索，也为布鲁氏菌病新药物研发、防治奠定了基础。

摘要： 本发明属于淡水养殖的技术领域，涉及基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法。本发明包括以下步骤：(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴，分离血细胞，裂解细胞提取蛋白质；(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段进行iTRAQ标记；(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析；(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析，分析获得差异表达蛋白质。本发明基于iTRAQ对受感染日本沼虾的快速蛋白质组学研究，为进一步研究免疫相关蛋白的作用提供参考。

摘要： 本发明提供了一种应用iTRAQ技术研究弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法，本发明还提供了一种与大脑发育调节蛋白相互作用的蛋白质或多肽、及其应用，本发明通过CoIP和Pulldown实验发现与大脑发育调节蛋白相互作用6个弓形虫蛋白，并进一步针对TgRPS14、TgH4基因进行基因敲除实验和神经行为学验证。本发明提供了的弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法能快速有效地进行蛋白质组学研究，有利于快速定位到具有研究价值或商业应用价值的检测靶标、防治药物靶点。

摘要： 本发明提供了一种烟草黑胫病0号和1号生理小种差异性肽段的鉴定方法，并按此方法鉴定出6个特有的肽段，其中，0号小种肽段具有SEQ ID NO：1‑3所示的氨基酸序列，1号小种肽段具有SEQ ID NO：4‑6所示的氨基酸序列。属于植物病原鉴定技术领域。该方法包括以下步骤：(1)提取烟草黑胫病菌的总蛋白；(2)以步骤(1)中得到的蛋白进行SDS‑聚丙烯酰胺凝胶电泳；(3)根据步骤(2)得到的电泳胶图挑选出差异条带；(4)将(3)获取的条带酶解，提取酶解肽段，进行LC‑MS分析；(5)对质谱结果采用Mascot2.2软件检索相应数据库，获得差异性蛋白肽段。

摘要： 本发明公开了一种山羊绒蛋白标记方法，提取绒山羊的绒和毛的蛋白质，测定总蛋白浓度；总蛋白的酶解，记录酶解情况及其蛋白含量，采用高效液相色谱二级质谱方法分析肽段组成和含量；将SWATH质谱获取的肽段数据作为非目标数据，IDA模式的无标记定量方法获取的肽段数据作为目标数据；测定差异表达蛋白含量，利用差异表达蛋白含量进行绒和毛的鉴别。本发明还公开了一种差异表达蛋白的肽段序列。本发明具有高度敏感性、动态范围广、快速的扫描速度、较高覆盖率、成本相对较低、试验操作简便和不受限制。

摘要： 本发明属于淡水养殖的技术领域，涉及基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法。本发明包括以下步骤：(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴，分离血细胞，裂解细胞提取蛋白质；(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段进行iTRAQ标记；(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析；(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析，分析获得差异表达蛋白质。本发明基于iTRAQ对受感染日本沼虾的快速蛋白质组学研究，为进一步研究免疫相关蛋白的作用提供参考。

摘要： 本发明涉及一种基于非标定量蛋白质组学技术寻找如皋黄鸡不同细胞或组织间差异表达蛋白的方法，包括以下步骤：（1）鸡不同细胞或组织的组织或细胞蛋白提取；（2）对步骤（1）中得到的不同组的细胞或组织蛋白进行胰酶酶解；（3）酶解后的细胞或组织蛋白进行液相色谱‑质谱联用分析；（4）对分析结果进行数据库搜库和注释分析。通过本发明，本发明的优越性在于：1、本发明能够较快的获得不同组织和细胞之间的差异表达蛋白。2、方法简单可行，可重复性强，结果准确。3、该方法适用于其他物种。

摘要： 本发明公开了一种便于蛋白质谱高效分析表达量差异蛋白的蛋白提取和电泳方法，属于蛋白质谱工程领域。本发明能高效的提取黑曲霉的蛋白并充分分离各个蛋白质点。其中，以如下配方的低温破壁液对黑曲霉进行破碎提取蛋白：无水乙醇20g，三氯乙酸5g，醋酸5g，十六烷基吡啶0.02g，十二烷基硫酸钠0.03g，蒸馏水定容至1L，该破壁液能增加蛋白的提取率。本发明的电泳方法为三向电泳，通过三向电泳更有利于黑曲霉的蛋白提取和区分蛋白表达的差异。

摘要： 本发明公开一种百合总蛋白的提取及双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法。该方法在百合总蛋白质的提取中设置转速为20000rpm，并反复沉淀离心至少3次，使得提取出来的百合总蛋白质颜色较白，质量好；增加了蛋白质的质量检测步骤，采取跑十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶的方式检测所提取出来蛋白质的质量，避免了后续第一向等电聚焦效果不好的问题。改进了第一向等电聚焦过程中聚焦程序，将聚焦程序中的步骤S1和S2两个除盐步骤的时间延长至2.5h，较好地去除了蛋白质的盐分，从而较好地完成了聚焦程序。本发明方法获得的百合总蛋白双向电泳差异蛋白质图谱背景清晰，蛋白质点多，蛋白质点分布均匀。

摘要： 本发明提供了一种缺血性脑损伤的差异蛋白组合，差异蛋白组一是和线粒体氧化磷酸化、核糖体通路相关的蛋白。脑缺血发生时，这些蛋白首先受到影响，通过测定其蛋白表达的变化，可表征脑缺血的发生。差异蛋白组二是和补体系统，HIF‑1信号通路相关的蛋白，差异蛋白组三是和PPAR信号通路相关的蛋白。脑缺血发生时，补体系统和HIF‑1信号通路被激活，产生大量的活性物质，增加了血管的通透性，可表征脑缺血发生的特征。脑缺血发生时，PPAR信号通路也被激活，对脑组织的神经元起保护作用。这三组差异蛋白组合均能作为生物标志物，对缺血性脑损伤、脑缺血病进行早期检测，灵敏度高、精度强。

摘要： 本发明公开了一种便于蛋白质谱高效分析表达量差异蛋白的蛋白提取和电泳方法，属于蛋白质谱工程领域。本发明发明能高效的提取黑曲霉的蛋白并充分分离各个蛋白质点。其中，以如下配方的低温破壁液对黑曲霉进行破碎提取蛋白：无水乙醇20g，三氯乙酸5g，醋酸5g，十六烷基吡啶0.02g，十二烷基硫酸钠0.03g，蒸馏水定容至1L，该破壁液能增加蛋白的提取率。本发明的电泳方法为三向电泳，通过三向电泳更有利于黑曲霉的蛋白提取和区分蛋白表达的差异。