犬α干扰素的克隆、表达及纯化

项黎丽; 闫若潜; 盛敏; 程增青

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犬α干扰素的克隆、表达及纯化

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根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含Sph Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaI FN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoR I酶切鉴定,初步证实为CaI FN-α,用Sph Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、Sph I和Hind Ⅲ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了Ca I FN-α,构建了重组表达质粒PQE30/Ca I FN-α.将重组表达菌液培养至0D600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析Ca I FN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右.将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的Ca IFN-α蛋白.本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础.

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来源
《中国动物检疫》 |2010年第1期|35-38|共4页
作者
项黎丽; 闫若潜; 盛敏; 程增青;
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作者单位

济源市畜产品质量监测检验中心,河南济源,454650;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450002;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450002;

青岛易邦生物工程有限公司,山东青岛,266032;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类兽医诊断学;转化及克隆;
关键词
犬α干扰素; 克隆; 表达; 纯化;

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