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4种猪源病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

         
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为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、尼帕病毒(NiV)、猪水疱病病毒(SVDV)以及口蹄疫病毒(FMDV)等4种猪源病毒的多重PCR检测方法,根据相关文献和GenBank中登录的参考病毒株序列,针对保守区域设计特异性引物,在单一PCR基础上对多重PCR条件进行优化.通过各项反应条件优化,确定ASFV、NiV、FMDV、SVDV引物体积比为2:1:1:1,退火温度为57°C以及35个循环时,扩增效果最好.敏感性试验显示,ASFV、NiV、FMDV和SVDV的最低检测限分别为390.0、46.0、20.9以及37.0 copies/μL.特异性试验显示,建立的多重PCR方法不与猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发生非特异性反应.利用本研究建立的多重PCR方法对48份临床样品进行检测,得到的检测结果与单一PCR一致.结果表明,建立的多重PCR方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点.本方法的建立为ASFV、NiV、FMDV和SVDV 4种猪病的快速检测、临床诊断和流行病学调查提供了新技术手段.

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