通过体外细胞培养观察补体C3对骨形成影响的实验研究

刘康; 童铭豪; 唐彬彬; 曹延广; 史晓林; 余阳

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目的:探讨慢病毒介导补体C3沉默载体转染人B淋巴细胞Raji-成骨细胞系MG63共培养体系对共培养体系成骨能力的影响及其作用机制。方法:构建慢病毒补体C3沉默载体,转染人B淋巴细胞Raji后建立体外Raji-成骨细胞系MG63共培养体系,分为空白对照组(不做特殊处理)、补体C3沉默组(慢病毒补体C3沉默载体转染共培养体系)与模型组(慢病毒空载载体转染共培养体系)。培养24 h后,采用反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法及Western-Blot法检测各组补体C3表达水平;各组分别培养0、3、6、12、24、48、72 h后采用CCK-8检测各组成骨细胞系MG63增殖能力;培养24 h后分别采用流式细胞术检测各组成骨细胞系MG63的细胞凋亡情况,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测盒检测各组MG63细胞AKP活力,采用Western-Blot法检测各组成骨细胞系MG63的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白表达水平。结果:RT-PCR法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组;Western-Blot法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组;CCK-8检测结果提示培养3、6 h后补体C3沉默组MG63增殖能力与空白对照组、模型组比较差异无统计学意义;培养12 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组;培养24、48、72 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组;流式细胞术检测结果提示补体C3沉默组成骨细胞系MG63的细胞凋亡水平低于空白对照组和模型组;AKP检测盒检测结果提示补体C3沉默组AKP活力高于空白对照组和模型组;Western-Blot法检测结果提示补体C3沉默组OPG蛋白表达水平高于空白对照组和模型组。结论:补体C3的沉默能够增强成骨细胞系MG63的骨形成能力,并且发挥这种能力需要时间的累积。补体C3可能通过改变OPG/RANKL/RANK轴来影响成骨能力。

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来源
《中国骨伤》 |2022年第6期|548-554|共7页
作者
刘康; 童铭豪; 唐彬彬; 曹延广; 史晓林; 余阳;
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作者单位

浙江中医药大学附属第二医院;

浙江中医药大学第二临床医学院;

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正文语种 chi
中图分类骨及骨骼生理学;
关键词
补体C3; 骨生成; 细胞培养技术; 碱性磷酸酶;

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