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高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠血小板内5-羟色胺的含量

         

摘要

目的:建立高效液相色谱一荧光检测测定大鼠血小板内5-羟色胺含量的方法.方法:色谱柱为Nucleosil-C18 (4 mm×250 mm,10 μm),流动相:磷酸二氢钾(10 mmol/L,内含EDTA-Na2 0.3 mmol,pH=3.5):甲醇:乙腈=85:10:5,流速:0.5 ml/min,荧光激发波长:254 nm,发射波长:360 nm,增益:32.血小板沉淀用300μl纯水悬浮,加入15μl内标溶液(30μg/ml,α-甲基-5-HT水溶液),100μl蛋白沉淀液,混匀,离心,取上清液20μl,进样.结果:5-羟色胺在0.25~4.00μg/ml浓度范围内,线性关系良好.5-羟色胺测定的批内和批间相对标准差(RSD)分别小于4.29%和4.44%,回收率为84.3%~88.7%.正常雄性SD大鼠血小板内5-羟色胺的平均含量分别为(1.65±0.14)μg/109plts.结论:本法简便、准确、快捷,可用于大鼠血小板内5-羟色胺的测定.

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