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来源于酸热脂环酸杆菌的嗜酸性α-淀粉酶的表达研究

         

摘要

从嗜酸耐热的酸热脂环酸杆菌Alicyclobacillus acidocaldarius中克隆到α-淀粉酶的基因(amy).该基因全长3903bp,编码1301个氨基酸,理论分子量约140kD。将基因amy分剐克隆到大肠杆菌E.coli表达载体pET-22b(+)和毕赤酵母P.pastoris表达载体pPIC90α,并在大肠杆菌和毕赤酵母中得到了表达,表达产物具有淀粉酶的活性。对酵母中表达的酶蛋白AMY进行了纯化,并初步研究了它的酶学性质,它的作用最适pH3.2,在pH2.5~4.6范围内,酶活性保留50%以上.它的最适温度65℃,在70℃下处理30min,酶活性维持50%以上,基本保留了天然酶蛋白的耐热性和嗜酸性。位于基因amy内部+1174~+3288bp的基因片段amy’全长2115bp,编码705个氨基酸,在E.coli表达后依然具有淀粉酶的活性.

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