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吉西他滨耐药细胞系H460/Gem的建立及其生物学特性研究

         
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摘要

目的:建立吉西他滨耐药细胞系H460/Gem,通过研究其生物学特性,初步从细胞水平分析其获得性耐药的可能机制.方法:以人肺大细胞癌细胞系NCI-H460为亲代细胞,采用"2/3临床血浆峰浓度间歇诱导"法,用吉西他滨进行诱导,建立耐吉西他滨的细胞亚系H460/Gem,把诱导过程中的细胞命名为H460/Gem'.分别在诱导前、诱导过程中和诱导成功后的三个不同时间点,采用MTT法检测其耐药指数和对其他化疗药物的敏感性,使用倒置光学显微镜观察形态学特征,通过绘制生长曲线计算倍增时间,以流式细胞术分析细胞周期分布,以免疫细胞化学染色检测P53、EGFR、C-erbB-2、PTEN、PCNA、c-myc、VEGF、MDR-1、Bcl-2、nm23、MMP-9、TIMP-1和CD44v6蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR法检测RRM1 mRNA表达.结果:H460/Gem'细胞对吉西他滨耐药指数为1.201时,对紫杉醇、氟尿嘧啶、依托泊甙、顺铂、奥沙利铂耐药,对长春瑞滨、多西他赛敏感;它的倍增时间(18.611小时)比NCI-H460细胞(16.731小时)稍延长,G0～G1期细胞减少(分别为51.56%和68.06%),VEGF、MMP-9表达减弱,失去CD44v6和P53表达,nm23表达增强,出现TIMP-1表达,EGFR、C-erbB-2、PTEN、PCNA、c-myc、MDR-1、Bcl-2表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量有所减少(分别为0.158 9和0.451 0).H460/Gem细胞对吉西他滨的耐药指数为1.644时,同时对氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂耐药,而对紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛和依托泊甙敏感,倍增时间(51.539小时)比NCI-H460细胞明显延长,G0～G1期细胞(57.23%)有所减少,MDR-1、nm23 、Bcl-2表达增强,出现C-erbB-2表达,P53、MMP-9和VEGR表达减弱,PTEN、PCNA、c-myc、TIMP-1、EGFR和CD44v6表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量(0.338 9)变化不大.与NCI-H460细胞相比,H460/Gem细胞逐渐呈现出如下形态学特征:形态不规则,大小不一,形态各异,且透光性减弱.结论:H460/Gem细胞的生物学特性较NCI-H460细胞发生了较大变化,其多药耐药性的发生与多种基因表达有关.

著录项

  • 来源
    《临床肿瘤学杂志》 |2007年第11期|805-809,813|共6页
  • 作者

    王伟霞; 刘晓晴; 刘广贤; 林莉; 郑晓玲; 朱运峰; 李晓兵;

  • 作者单位

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

    100071,北京,解放军军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌内科;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 化学（药物）疗法;肺肿瘤;
  • 关键词

    吉西他滨; 耐药; 非小细胞肺癌; 基因;

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