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基于巯基-炔基点击化学的苯硼酸功能化材料的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用研究

         
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摘要

硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟.硼酸亲和材料的选择性、生物相容性、制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题.本研究针对硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并制备了一种新型苯硼酸功能化材料(TYBA材料).此材料采用基于巯基-炔基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便.红外光谱表征结果证明材料合成成功.采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测试TYBA材料的糖肽富集选择性,结果表明,TYBA材料能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(IgG)酶解液中鉴定出11个和8个糖肽;以HRP-牛血清白蛋白(BSA)酶解液(1:10,n/n)混合物作为研究对象,富集后能够鉴定出8个糖肽信号.采用SDS-PAGE凝胶电泳考察TYBA材料的糖蛋白富集选择性,以HRP、IgG、核糖核酸酶B(RNaseB)作为考察对象,结果表明,TYBA材料对不同类型糖蛋白具有较好的富集选择性.以实际人血清样品为测试对象验证TYBA材料在实际生物样品中的应用价值.结果表明,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集.所制备的材料和方法具有大规模分离处理实际蛋白质样品的应用前景.

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