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大鼠阴茎海绵体内皮细胞的分离培养与鉴定

         

摘要

目的 研究建立体外分离、培养并鉴定SD大鼠阴茎海绵体内皮细胞的方法。方法 无菌分离SD大鼠阴茎组织,胶原酶消化并结合机械刮除法纯化内皮细胞,EGM-2完全培养液培养11天后传代,培养至第2代时,HE染色后光镜下进行内皮细胞形态学观察,CCK8法绘制细胞生长曲线,并通过免疫荧光法鉴定内皮细胞中CD31、vWF的表达,流式细胞术检测1~4代内皮细胞周期变化,激光共聚焦观察1~4代内皮细胞标志物vWF的表达变化。结果 胶原酶消化分离所得大鼠阴茎海绵体内皮细胞在11~14d细胞覆盖培养瓶面积的2/3以上; HE染色后光镜下可见细胞呈现典型铺路石状; CD31、vWF免疫荧光共染阳性表达率为(86.19±1.14)%,vWF在前4代细胞均可稳定表达,且第2、3代细胞生长周期稳定。结论 胶原酶消化法结合机械刮除可成功分离出较高纯度的大鼠阴茎海绵体内皮细胞,并稳定传代4代、可作为阴茎海绵体内皮细胞研究的细胞模型建立方法。

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