茶黄素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡

田朋; 谢维娜; 丁红研; 单兴根; 刘畅; 李玉; 赵畅冯士彬; 王希春; 吴金节

摘要

本试验旨在研究茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用机制。采用不同浓度[0(A组)、48(B组)、88(C组)、128μmol/L(D组)]茶黄素处理小鼠乳腺肿瘤细胞(C-127细胞)24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测细胞活性与坏死情况,透射电镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测半胱氨酸特异性天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA相对表达量,Western Blot法检测活化后的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、PI3K、Akt、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞存活率显著降低(P<0.05),C组、D组细胞存活率极显著降低(P<0.01)。2)与A组相比,B组、C组、D组细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。3)与A组相比,B组Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),PI3K、Bcl-2的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),Caspase-3、Bax的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);C组和D组PI3K、Bcl-2和Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),Caspase-3和Bax的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。4)与A组相比,B组Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),Cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01);C组和D组Cleaved-Caspase-3和Bax的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),PI3K、Akt、Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。5)荧光显微镜和透视电镜观察可见,随着茶黄素浓度的升高,细胞活性逐渐降低,坏死细胞逐渐增多,线粒体变大,线粒体嵴增多;染色质浓缩分布在核膜周围或一侧,呈眼球状;自噬体内吞噬线粒体、内质网和一些细胞内的胞质成分,再与细胞膜融合后,形成凋亡小体。综上所述,茶黄素可通过PI3K/Akt信号通路促进促凋亡基因的表达,降低抗凋亡基因的表达,从而促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用;并且,随着茶黄素浓度的增大,茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用增强。

茶黄素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡

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