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小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤及对沉默信息调节因子2相关酶1信号通路的影响

         
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本试验旨在通过探究不同浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))对小鼠卵巢颗粒细胞(MOGC)氧化应激损伤的影响,以构建MOGC氧化应激模型,并探究氧化应激损伤对沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路的影响。试验选用MOGC,采用单因素试验设计,分别用0(对照组)、100、200、400和800μmol/L H_(2)O_(2)处理24 h,测定细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)生成量、相关抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及凋亡相关基因表达。结果表明:1)与对照组相比,不同浓度H_(2)O_(2)组细胞活力均显著降低(P<0.05),当H_(2)O_(2)浓度大于200μmol/L并且作用时间超过24 h时,细胞活力低于50%。2)与对照组相比,不同浓度H_(2)O_(2)组细胞凋亡率显著提高(P<0.05)。3)与对照组相比,200、400和800μmol/L H_(2)O_(2)组细胞内ROS生成量显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,400μmol/L H_(2)O_(2)组细胞内超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05);400、800μmol/L H_(2)O_(2)组细胞内过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和还原型谷胱甘肽含量显著降低(P<0.05),细胞内MDA含量显著提高(P<0.05);200μmol/L H_(2)O_(2)组细胞内GSH-Px活性显著降低(P<0.05),细胞内MDA含量显著提高(P<0.05)。5)与对照组相比,800μmol/L H_(2)O_(2)组细胞中B细胞淋巴瘤-2相互作用的细胞死亡中介物(Bim)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),细胞中B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);400μmol/L H_(2)O_(2)组细胞中Caspase-3 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),细胞中Bcl-xL mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);此外,200、400和800μmol/L H_(2)O_(2)组细胞中SIRT1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),而细胞中叉头盒蛋白O1(FoxO1)、p53 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。结果提示,200μmol/L H_(2)O_(2)处理24 h为建立MOGC氧化应激模型的理想条件,并且SIRT1-FoxO1/p53通路参与了H_(2)O_(2)诱导的MOGC凋亡。

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