含有Th细胞表位的合成PCV2 ORF2 Cap多肽抗原的表达及免疫原性分析

陈善真; 赵焱; 李中圣; 罗均; 陈克宏; 王贵平; 李其昌

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拟测定在PCV2ORF2 Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2 Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性.采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2 Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成.合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21 (DE3) pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21 (DE3) pLysS-pET-30a-P1.经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况.结果表明,设计合成表达的PCV2 P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29 ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P＜0.05).这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2015年第12期|2273-2281|共9页
作者
陈善真; 赵焱; 李中圣; 罗均; 陈克宏; 王贵平; 李其昌;
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作者单位

广东海大畜牧兽医研究院有限公司,广州511400;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
PCV2; Th细胞表位多肽; Cap蛋白;

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