免疫外科法分离山羊囊胚内细胞团的研究

杨炜峰; 葛秀国; 华进联; 窦忠英

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分别用关中奶山羊脾脏细胞和胎儿成纤维细胞,免疫新西兰白兔各2只,共4只.通过3次静脉注射,每次注射4×108个细胞,间隔10 d,最后一次注射10 d后心脏采血制备抗血清,结果获得的4份抗血清均具有细胞毒性,由脾脏细胞免疫获得的抗血清溶解细胞的效价稍高.超排关中奶山羊24只和波尔山羊3只,6～9 d采胚共获得胚胎240枚,其中囊胚106枚,结果显示配种后7～9 d胚胎的发育阶段适宜于分离内细胞团(ICM).细胞毒性试验表明,抗血清对关中奶山羊红细胞、囊胚和波尔山羊囊胚均具有细胞毒性作用.通过比较抗血清50%溶解山羊红细胞效价与溶解囊胚滋养层细胞效价的差异,发现后者的适宜效价是抗血清50%溶解山羊红细胞效价的22～23倍,表明采用易于获得的山羊红细胞作预试验可以为免疫外科分离山羊ICM提供抗血清稀释比例参考.免疫外科法分离ICM采用两步法进行,获得最佳参数如下:抗血清稀释比例为1∶4～1∶15,补体稀释比例为1∶20,先在抗血清中作用30 min,再在补体中作用20～30 min,吹打除去溶解的滋养层细胞后即可获得ICM.分离得到的ICM形态特征与胚胎质量密切相关.山羊ICM接种于丝裂霉素处理过的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层后,2 d内贴壁.4～7 d后,ICM增殖为胚胎干细胞样集落,其周围出现大量空泡样细胞.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2006年第6期|560-565|共6页
作者
杨炜峰; 葛秀国; 华进联; 窦忠英;
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作者单位

西北农林科技大学,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100;

西北农林科技大学,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100;

西北农林科技大学,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100;

西北农林科技大学,陕西省干细胞工程技术研究中心,杨凌,712100;

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正文语种 chi
中图分类 S826.3;
关键词
山羊; 抗血清; 补体; 免疫外科; 内细胞团; 细胞毒性;

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